Polymerase kædereaktion i diagnosen infektionssygdomme

PCR - en af ​​fremgangsmåderne til DNA-diagnostik gør det muligt at øge antallet af kopier af en detekterbar del af genomet( DNA) af bakterier eller vira er en million gange ved anvendelse af en DNA-polymerase-enzym. En test for denne specifikke genomiske nukleinsyresegment gentagne gange multipliceret( amplificeret), der tillader dets identifikation. Først et DNA-molekyle af bakterier eller vira ved opvarmning opdelt i to kæder, og derefter i nærvær af de syntetiserede DNA-primere( sekvens af nukleotider specifikke for det definerede genomiske) binder dem med komplementære strækninger af DNA, syntetiseret den anden streng af nukleinsyren efter hver primer i nærværelse af en varmestabil DNA-polymerase. To DNA-molekyler opnås. Processen gentages mange gange. Til diagnose, kun et DNA-molekyle, dvs. en bakterie eller viruspartikel. Omsætning af et yderligere trin - DNA-syntese på RNA-molekylet ved anvendelse af enzymet revers transkriptase - har lov til at teste RNA-vira såsom HCV virus. PCR - tretrinsproces, gentagne cyklusser af denaturering, annealing af primere, DNA-syntese( polymerisation).Den syntetiserede mængde DNA er identificeret ved ELISA eller ved elektroforese.

PCR kan anvendes diverse biologisk materiale - serum eller blodplasma, skrabning af urinrøret, biopsi, pleuravæske, cerebrospinalvæske, etc. Den første PCR blev anvendt til diagnosticering af infektionssygdomme, såsom HBV, HCV, HBV, CMV-infektion, infektiøs seksuelt overførte infektioner( gonorré, trash diynaya, myco plasma, ureaplasmal infektion), tuberkulose, HIV og så videre.d.

PCR fordel ved diagnose af smitsomme sygdomme end andre metoder undersøgelser er som følger:

■ smitstof kan påvises i en hvilken som helst biologiske miljø af organismen, herunder de materialer opnået ved biopsi;

■ mulig diagnose af smitsomme sygdomme i de tidligste stadier af sygdommen;

■ mulig kvantitativ vurdering af resultaterne af forskning( som en virus eller bakterie, der er indeholdt i materialet);

■ Metodens høj følsomhed;fx følsomhed PCR til påvisning HBV viral DNA i blodet 0,001 pg / ml( ca. 4h102 kopier / ml), hvorimod følsomheden af ​​en DNA-hybridisering fremgangsmåde under anvendelse af forgrenede prober - 2,1 pg / ml( ca. 7h105 kopier / ml).