Analýza polymorfismu délky restrikčních fragmentů
Široké použití různých restrikčních endonukleáz pro analýzu chromozomální DNA odhalilo obrovskou variabilitu lidského genomu. Dokonce i malé změny v kódovacích a regulačních oblastech strukturních genů mohou vést k ukončení syntézy určitého proteinu nebo ke ztrátě jeho funkce v lidském těle, což obvykle ovlivňuje fenotyp pacienta. Přesto přibližně 90% lidského genomu sestává z nekódujících sekvencí, které jsou více variabilní a obsahují mnoho takzvaných neutrálních mutací nebo polymorfismů a nemají fenotypový výraz. Taková polymorfní místa( lokusy) se používají při diagnostice dědičných onemocnění jako genetických markerů.Polymorfní lokusy jsou přítomny ve všech chromozomech a jsou spojeny se specifickým místem genu
.Po určení lokalizace polymorfního lokusu je možné zjistit, s jakým genomem je spojena mutace, která způsobila onemocnění u pacienta.
Pro izolaci polymorfních oblastí DNA se používají bakteriální enzymy - restrikční enzymy, jejichž produktem jsou restrikční místa. Spontánní mutace, které se vyskytují v polymorfních místech, je činí odolnými nebo naopak citlivými na působení specifického restrikčního enzymu.
Mutační variabilita v restrikčních místech může být detekována změnou délky omezených fragmentů DNA, jejich separací pomocí elektroforézy a následné hybridizace se specifickými DNA sondami. Při nepřítomnosti omezení v polymorfním místě se na elektroforegrech detekuje jeden velký fragment a pokud je přítomen, bude přítomen menší fragment. Přítomnost nebo nepřítomnost restrikčního místa v identických místech homologních chromozomů umožňuje spolehlivě označit mutantní a normální gen a sledovat jeho přenos na potomstvo. Při studiu DNA pacientů, u obou chromozomů, u kterých je restrikční místo přítomno v polymorfní oblasti, budou na elektroforu detekovány krátké DNA fragmenty. U pacientů homozygotních pro mutaci, která modifikuje polymorfní restrikční místo, budou detekovány fragmenty s větší délkou a v heterozygotních fragmentech budou identifikovány krátké a dlouhé fragmenty.