Vyšetřování enzymů a isoenzymů

Enzymy jsou specifické proteiny, které plní úlohu biologických katalyzátorů v těle. Enzymy jsou obsaženy ve všech buňkách těla, kde jejich koncentrace je mnohem vyšší než v krevní plazmě.Sérum

krve, jehož enzymatické složení je relativně konstantní, se nejčastěji používá jako objekt pro výzkum. Normální aktivita enzymů v séru odráží vztah mezi biosyntézou a uvolňováním enzymů( s obvyklou obnovou buněk), stejně jako jejich clearance z krevního řečiště.Zvýšení rychlosti obnovy enzymů, poškození buněk obvykle vede ke zvýšení aktivity enzymů v séru. Ve séru krve se rozlišují tři skupiny enzymů: buněčné, sekreční a vylučovací.

buněčné enzymy, v závislosti na umístění ve tkáni rozděleny do dvou skupin:

■ nespecifická enzymy, které katalyzují společné pro všechny tkáně výměně reakce a ve většině orgánů a tkání;

■ organ-specifické nebo indikátorové enzymy specifické pouze pro specifický typ tkáně.

Sérová aktivita buněčných enzymů je nízká nebo neexistuje. V patologických procesech závisí aktivita enzymů této skupiny v séru od rychlosti uvolňování z buněk, což je zase určováno rychlostí a stupněm jejich poškození.

Sekreční enzymy( ceruloplasmin, pseudocholinesterasa, lipoproteinová lipáza) přecházejí přímo do krevní plazmy a vykonávají v ní specifické funkce. Tyto enzymy se syntetizují v játrech a neustále se uvolňují do plazmy. Jejich aktivita v séru je vyšší než v buňkách nebo tkáních. V klinické praxi jsou zajímavé, když je jejich aktivita v krevním séru nižší kvůli zhoršené funkci jater.

Vylučovací enzymy tvoří trávicí systém( pankreas, střevní sliznice, játra, endotelové žlučové cesty).Patří sem a-amyláza, lipáza, alkalická fosfatáza atd. Normálně je jejich sérová aktivita nízká a konstantní.Nicméně, v patologii, kdy je zablokována jakákoliv z obvyklých cest vylučování, aktivita těchto enzymů v séru se významně zvyšuje.

Naměřená aktivita enzymů může být způsobena přítomností velmi podobných molekulárních vlastností enzymů, které jsou ve vlastnostech velmi podobné, ale navzájem se liší.Tyto různé formy se nazývají izoenzymy. Vyšetřování izoenzymů v klinické praxi je zajímavé, když se jednotlivé izoenzymy vytvářejí v různých tkáních( například v srdci a játre převažují různé izoenzymy LDH).

Pro kvantifikaci enzymové aktivity doporučila Komise pro enzymy Mezinárodní biochemické unie standardní mezinárodní jednotku( IU).Jednotka aktivity libovolného enzymu je považována za množství, které za optimálních podmínek katalyzuje konverzi 1 μmol substrátu za minutu( μmol / min).

Aktivita enzymu se hodnotí rychlostí katalyzované reakce při určité teplotě a pH prostředí, koncentraci substrátu. Proto při stanovení aktivity enzymů musí být striktně dodržovány stejné podmínky.

Enzymatická reakce je citlivá na změny teploty. Obvykle se provádí při teplotě v rozmezí

25-40 ° C, ale při různých teplotách se optimální pH, pufr, substrát a další parametry liší.Maximální aktivita většiny enzymů v lidském těle je pozorována při teplotě přibližně 37 ° C.Proto se pro účely mezinárodní standardizace provádí měření enzymové aktivity při dané teplotě.Pod normální hodnoty enzymové aktivity se uvádí teplota 37 ° C.Studie

enzymy používané v klinické praxi pro různé úlohy: diagnóza, diferenciální diagnostiku, hodnocení dynamiky onemocnění, stanovení účinnosti léčby, stupeň výtěžnosti a prognózu. Existují tři typy enzymů změn v patologii: giperfermente mia - zvýšenou aktivitu enzymů, než je obvyklé, hypo-enzym obsah - její pokles disfermentemiya - ve vzhledu krevních enzymů, které nejsou běžně nalezeny.