Imunoenzymová analýza( EIA) - příčiny, příznaky a léčba. MF.

na imunosorbent( ELISA) - moderní laboratorní vyšetření, během kterého je pátrání specifických protilátek nebo antigenů v krvi na konkrétní onemocnění, k identifikaci nejen etiologie, ale i stádium onemocnění.Výsledky testu ELISA lze hodnotit kvalitativně a kvantitativně.V současné době

EIA se používá v následujících situacích:

1) vyhledávání specifických protilátek proti jakékoli infekční choroby;
2) hledání antigenů všech onemocnění( infekční, venerózní);
3) vyšetření hormonálního stavu pacienta;
4) zkouška pro přívěšky;
5) vyšetření na přítomnost autoimunitních onemocnění.Výhody způsobu

ELISA:

1) s vysokou specifičnost a citlivost testu ELISA( více než 90%).
2) Schopnost procesních dynamiky onemocnění stanovení a sledování, tj. Porovnáním množství protilátek v různých časových intervalech.
3) Dostupnost diagnostiky ELISA v každé zdravotnické instituci. Relativní nedostatek

:

1) detekci imunitní odpovědi( protilátky), ale ne z patogenu.

Concepts

Před objasnit podstatu metody ELISA, stručně to pochopit některé pojmy.

Protilátky( nebo imunoglobuliny - Ig) - specifické proteiny produkované B -
lymfocytů( buňky imunitního systému), v reakci na vstupu do těla infekčního patogenu( viry, bakterie, houby, atd.)Vylučují imunoglobulinu A( IgA), imunoglobulinu E( IgE), imunoglobulin M( IgM), imunoglobulin G( IgG), imunoglobulin D( IgD).Liší se od sebe navzájem a tvoří molekulovou hmotnost poloviny životní účast / nonparticipation v infekčních procesů, rozpoznat časování od okamžiku infekce. Pokud vezmeme v úvahu molekulové hmotnosti, nejvíce je to IgM - je pentamer( 950000 Da), na rozdíl od zbytku Ig( 150 až 200 000 Da), tak IgM jednoduše nemohou procházet placentární bariérou. Proto je detekce IgM v dětské 1 roku života je vždy příznakem infekce u plodu. Převážná sérových imunoglobulinů je reprezentován IgG( 75-85%) a nejnižší - IgE( 0,003%).Infekční proces přímo zapojen přičemž pouze IgA, M, G. IgE jsou známkou alergickými reakcemi a podmínkami, a IgD - mohou být detekovány pouze v lymfatických uzlinách a tonsil, hraje roli při tvorbě lokální imunitu.

tříd imunoglobulinů

Antigeny - vysokomolekulární organické látky, zejména infekčních patogenů a jiných onemocnění, stejně jako různé substance modifikované buňky jsou produkovány v daném onemocnění( autoimunitní onemocnění, rakovina).

Imunitní komplex - antigen-protilátka zapojené do imunitní procesu. Na čem je založena metoda IFA?

několik odlišných odrůd ELISA( přímá, nepřímá, blokování metoda soutěžícími), ale v praxi se nejčastěji používají heterogenní enzymového imunologického testu nebo testu ELISA( Enzyme linked immunosorbent assay)

základě imunoanalýzy imunitní odpovědi na antigen a protilátky za vzniku imunitního komplexu: antigenbispecifické protilátky, což má za následek změnu enzymatické aktivity konkrétních značek na povrchu protilátky. Způsob

ELISA

Jednoduše řečeno, tento proces může být rozdělen do několika etap:

1) na povrchu desky lékař-ti jamkové průzkumový je vyčištěný antigen specifický patogen. Při přidání biologického materiálu( v krevním séru) pacienta specifické reakci dochází mezi antigenem a požadované protilátky( imunoglobulinu).Tato sloučenina bude v dalším stupni působit jako "speciální antigen".

2) V této fázi tvorby je IR( imunokomplexy) - reakce mezi „specifický antigen“ a konjugátu( tento imunoglobulin značená peroxidázou enzymem).Přidá se speciální chromogen. Výsledkem této enzymatické reakce je tvorba barevných látek v jamkách destičky, intenzita barvy, která je závislá na počtu imunoglobulinů pacientů( protilátky), obsažených v materiálu.

3) Dále Interpretace: fotometrie s použitím vícekanálové spektrofotometru porovnáním optické hustoty testovaného materiálu s optickou hustotou kontrolních vzorků, matematické zpracování výsledků.Množství protilátky v pacientovi, závisí na výšce optická hustota jamek.

běžnou praxí používat v 96 jamkových destiček.se vypočítá množství

( nebo koncentrace) protilátek v určitém jednotku objemu při měření optické hustoty( OD) vzorku tekutiny. Výsledkem je pak ve srovnání s kontrolním vzorkem.

třeba mít na paměti: pro každý testovací systém vyvinutý brát v úvahu výsledky individuálního výkonu, standardy výkonu a patologii( tzn „referenční hodnoty“).To by se mělo vzít v úvahu při hodnocení výsledků každé případové studie. Správně interpretovat výsledky laboratorních „referenční hodnoty“ jiné laboratoře. Je také nesprávné porovnat výsledky z různých laboratoří společně.Při nastavení

ELISA reakce a má takovou hodnotu, koncept jako protilátky avidity. Avidita
protilátka - tato protilátka vazebná síla antigen a množství antigenu se nachází ve vzájemném vztahu s immnoglobulinami( protilátky).Avidita má velký význam při posuzování údajné infekce termínu, což je velmi důležité při diagnóze primární infekce u těhotných žen.

Základní protilátka avidita test se skládá z ošetření imunitního komplexu( antigen-protilátka) roztoku močoviny s cílem zničit protein. Vysokoavidnye odkazy zůstanou neporušené a nízké avidity zničeny. Výsledek se udává jako index avidity, vyjádřený v procentech( %).

Jaké nemoci jsou detekovány ELISA-diagnostika?

1. Infekční nemoci
1.1 Virová hepatitida A( IgM, G), B antigeny -HBsAg, HBeAg, protilátka - IgM HBcorAg, Ig celkový HBcorAg, IgG HBeAg), C( protilátky Ig M, G HCV), D( IgM,G), E( Ig M, G) a další.
1,2 HIV infekce( IgG)
1,3 cytomegalovirové infekce( protilátky IgM, G)
1,4 Epstein-Barrové infekce nebo mononkleoz( IgM, G k EA, VCA, Na proteiny viru)
1,5 Herpetické infekce( IgM, G)
1,6 toxoplazmóza( IgM, G)
1,7 Rubella( IgM, G)
1,8 spalniček( IgM, G), brucelóza( IgM, G), pseudotuberculosis( IgM, G), salmonelózy( IgM, G), Shigelóza nebo úplavice(IgM, G), aspergilóza( IgM, G), klíšťová encefalitida, borelióza, a mnoho dalších.
1,9 parazitózy( giardiáza, larvální toxokaróza, trichinóza, opistorhoz, echinokokóza, alveococcosis a další), v níž je detekovaná IgG
1,10 STD( pohlavně přenosné choroby přes) - mykoplazmóza( IgM, G), Ureaplasmosis( IgM, G), chlamydie( IgA, M, G), syfilis( IgG)
1,11 Helicobacter infekce( IgG)

2. markery autoimunitního onemocnění a indexy imunity lidského ( celkové IgE, celkového IgG, celkového IgA, celkem IgM, celkem IgD, sekreční IgA, IgG 2, IgG4, CRC cirkulujících imunokomplexů, IgA a IgG protilátek proti gliadinu a další)

3. Onkologichsekie markery ( FNO - faktoru nekrosy nádorů, CEA - karcinoembryonální antigen, PSA - prostatického specifického antigenu, hCG - lidský choriový gonadotropin, CA 125, alveomutsin a mnoho dalších)

4. Reprodukční poruchy I( estradiol, progesteron, prolaktin, testosteron, AFP AFP-FSH - folikuly stimulující hormon a další)

5. nemoci štítnou žlázu( volný a vázaný T3, T4, thyreoglobulinu, štítné žlázy peroxidáza - TPO, hormonu stimulujícího štítnou žlázu - TTG).

Tento seznam není zdaleka ne všechny nemoci jsou diagnostikovány testem ELISA.

materiál pro ELISA analýzu a pravidlo plot

nejběžnějším materiálem pro ELISA reakcí - pacientova séra, které byly na lačno. Materiál může také sloužit jako mozkomíšní mok, plodová voda, sklovitých obsah, hlenu děložního hrdla a uretry tampony.

Příprava pacientů na dodávky materiálu pro IFA

odebrána krev na lačný žaludek. Před dodáním krve nemusí brát žádné léky. Specifická léčba( antibakteriální, antivirové, proti parazitům, a tak dále), musí být zastaven nejméně 2 týdny před studií.

výrobu IFA Data

Imunoanalýza enzymů se provádí rychle během dne. Zpoždění může být v různých laboratořích kvůli akumulaci určitého počtu sér. Možné výsledky

ELISA diagnostický

při posuzování výsledků na konkrétní infekci je důležitou třídu protilátky detekovány a jejich počet. To má vliv nejen na otázku etiologie infekce( tj, nebo ne), ale odhaduje stadium onemocnění( akutní a chronické), stejně jako přítomnost aktivní infekce( akutní nebo exacerbace chronické) v době průzkumu.

Jaké jsou přibližné termíny pro výskyt protilátek( imunoglobuliny-Ig)?

Nejčasnější protilátky jsou IgM .Identifikovat je může být 1-3 týdny po možné infekci, která charakterizuje akutní fázi infekčního procesu. Druhou situací s výskytem IgM protilátek je aktivace( nebo exacerbace) chronického procesu. IgM protilátky cirkulují v průměru asi 3 měsíce, pak jejich počet postupně zmizí.U některých pacientů však mohou být detekovány stopové množství IgM během 1-2 let od doby infekce.

Moderní testovací systémy jsou velmi citlivé, což vede k nešpecifickým falešně pozitivním výsledkům( často těhotným ženám).Proto u této skupiny pacientů by měl být pozitivní IgM znovu zkontrolován!

IgA protilátky se objevují 2-4 týdny po infekci, ale v množství dostatečné k detekci - za měsíc. Sérum IgA syntetizován plazmatickými buňkami sleziny, lymfatických uzlin a slizničních sekrečních IgA soustředěných na sliznice plnit svou ochrannou funkci - podílejících se na lokální imunitu.

Od 4. týdne po infekci se začínají objevovat protilátky IgG .U většiny infekcí se jejich titr postupně zvyšuje s maximem v různých časech( v průměru po 1,5-2 měsících), pak titr zůstává na nízké úrovni a indikuje imunitu. V některých onemocnění( mykoplazmózy, chlamydie, trichomoniáza) hladina IgG není vysoká, je výrazně snížena v důsledku nedostatku imunity u těchto infekcí.detekce provedení

protilátek z různých tříd:

- Detekce protilátek IgM Izolované předpokládá
primární infekci.
- simultánní detekci krve IgM a IgG charakteristické
primární infekce v předchozích 2-3 měsíce, jakož i exacerbace chronické onemocnění.Proto v těhotenství není přítomnost IgM vždy známkou primární infekce.
- Detekce izolovaného IgG může indikovat jak imunitu vůči onemocnění, tak
a chronickou infekci. Ve druhé situaci je také důležitý počet protilátek( titru) a změna v tomto titru je v dynamice. Obvykle se studie provádějí v intervalech 2-4 až 6 týdnů.
- Detekce IgA izolované nebo IgM indikuje primární infekci. U
se očekává, že vzhled IgA společně s IgG aktivuje chronickou infekci( v průměru 2 týdny od doby exacerbace).IgG protilátky

Definice avidity je vynikajícím doplňkem k diagnostice fázi primární infekce z dlouhotrvající infekce, která má své klinický význam, a to zejména při vyhodnocení rizika intrauterinní infekce plodu. Detekce IgG nízkého stupně označuje primární infekci a je zjištěna v průměru 4-6 měsíců po infekci, méně často delší dobu. IgG s nízkou dávkou vyžaduje další laboratorní důkaz primární infekce( IgM).Vysoké protilátky jsou buď známkou chronického onemocnění a jeho zhoršení, nebo tvořené imunity.

zejména u dětí: u dětí do jednoho roku, a někdy dokonce 1,5 roku v krvi cirkulující IgG protilátky mateřské na různé infekce( tj byl jejich pronikání přes placentu z matky na plod v děloze).To samo o sobě není známkou infekce v přítomnosti. Pokud se ve věku takjm detekovány IgM( připomeňme, že mateřská IgM přes placentu nemůže), je to znamení infekce nebo intrauterinní infekce získané po narození.

Kvantitativní metoda ELISA

Výsledek diagnostiky ELISA( pomocí enzymového imunoanalýzy) je uveden v určitých jednotkách:
- Optická hustota( OP) vzorku je koncentrace specifických protilátek na jednotku objemu.Čím vyšší je OP vzorek, tím vyšší je koncentrace protilátek. Některé výsledky se týkají koeficientu pozitivity( KP) - to je také optická hustota vzorku.
- Jednotky koncentrace protilátek( nanogram / mililitr nebo ng / ml).
- v titru v séru: 1:20, 1:40, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800, 1: 1200, a tak dále. Diagnostické titry( u kterých je diagnostikována nemoc, nikoliv fakt infekce) u různých onemocnění jsou odlišné.
- ve formě symbolů - "+", "-", "?"( +, ++, +++, ++++).
- ve formě kvalitativního hodnocení založeného na daném kritériu( pozitivní nebo negativní).

Je správné odhadnout počet protilátek, což je varianta třídní detekce imunoglobulinů, a následně vystavit stádium onemocnění a potřeba léčby může provádět pouze lékař.

Nemělo by být zapomenuto, že u každého testovacího systému se při jeho překročení vyvíjejí "referenční hodnoty"( varianty normy) a diagnostikována tato nebo onemocnění( varianty patologie).U různých zkušebních systémů jsou "referenční hodnoty" různé.

Správné porovnání výsledků analýzy ELISA v dynamice je možné pouze tehdy, pokud jsou vyrobeny ve stejné laboratoři.

Infekční lékařka Bykova N.I.