Immunoentsyymi-analyysi( EIA) - Syyt, oireet ja hoito. MFien.

( ELISA) - nykyaikainen laboratorio tutkimus, jonka aikana etsitään on spesifisiä vasta-aineita tai antigeenejä veressä tiettyihin tauteihin tunnistaa paitsi etiologia, vaan myös taudin vaiheesta. ELISA: n tulokset voidaan antaa kvalitatiivisesti ja kvantitatiivisesti.

Tällä hetkellä EIA käytetään seuraavissa tilanteissa:

1) Hae spesifisten vasta-aineiden mitä tahansa tarttuvan taudin;
2) haku antigeenien minkä tahansa sairauksien( infektiotauteja, sukupuolitauteja sairaudet);
3) potilaan hormonaalisen tilan tarkastelu;
4) tarkastus päällirakentajille;
5) testataan läsnä autoimmuunisairauksien. Edut

ELISA-menetelmä:

1) suuri spesifisyys ja herkkyys ELISA: lla( yli 90%).
2) Kyky määrittää ja seurata taudin prosessin dynamiikka, eli vertaamalla vasta-aineiden määrä eri aikavälein.
3) ELISA diagnostisia saatavuus tahansa hoitolaitoksen. Suhteellinen puute

:

1) havaitseminen immuunivasteen( vasta-aineita), mutta ei patogeenin.

Käsitteet

Ennen selventää ydin ELISA-menetelmän, lyhyesti on ymmärtää joitakin käsitteitä.

Vasta-aineet( tai immunoglobuliinit - Ig) - spesifisten proteiinien oli tuotettu B -
lymfosyytit( immuunijärjestelmän solut) vasteena tulon kehoon tarttuvan patogeenin( virus, bakteeri, sieni, jne.).Erittävät immunoglobuliini A( IgA), immunoglobuliini E( IgE), immunoglobuliini M( IgM), immunoglobuliini G: tä( IgG), immunoglobuliini D( IgD).Ne eroavat toisistaan ​​ja muodostavat moolimassa puoli elämän osallistuminen / nonparticipation tarttuvan prosesseissa, havaitsemaan ajoituksen infektion aikana. Jos ajatellaan molekyylipaino, eniten hän IgM - on pentameeri( 950000 Da), toisin kuin muualla Ig( 150-200 000 Da), joten IgM yksinkertaisesti voi kulkea istukan. Siksi IgM lapsen 1 vuoden elämä on aina merkki infektiosta sikiössä.Suurin seerumin immunoglobuliineja on esitetty IgG: n( 75-85%), ja alin - IgE-(0003%).Infektioprosessi osallistuvat suoraan ottaen vain IgA, M, G-IgE ovat merkki allergisten reaktioiden ja tilojen, ja IgD - voidaan havaita vain imusolmukkeissa ja nielurisojen kudos, on rooli muodostumista paikallisen immuniteetin.

immunoglobuliinien luokkaa

antigeenien - korkean molekyylipainon orgaanisten aineiden, erityisesti tarttuvien patogeenien ja muiden tautien, sekä erilaisia ​​aineita muunnettujen solujen tuotetaan tietyssä taudin( autoimmuunisairaus, syöpä).

Immuunikompleksi - antigeeni-vasta-osallisena immuunijärjestelmän prosessissa. Mikä on IFA-menetelmän mukainen?

Useiden erilaisten ELISA-lajikkeita( suorat, estämällä menetelmä kilpailijat), mutta käytännössä yleisimmin käytetty heterogeeninen entsyymi-immunomäärityksellä tai ELISA: lla( entsyymiin kytketty immunosorbenttimääritys)

perusteella immunomääritys immuunivastetta antigeenin ja vasta-aineen muodostamiseksi immuuni kompleksi: antigeenibispesifiset vasta-aineet, joka johtaa muutokseen entsymaattisen aktiivisuuden erityisiä jälkiä vasta-aineen pinnalla. Menetelmä

ELISA

Yksinkertaisimmillaan tämä prosessi voidaan jakaa useaan vaiheeseen:

1) pinnalla lääkärin-reikälevyn, tutkijan on puhdistettu antigeeni ei esiintynyt spesifisiä taudinaiheuttajia. Kun lisätään biologisen materiaalin( veren seerumin) potilaan erityinen reaktio tapahtuu välillä antigeenin ja halutun vasta-aineen( immunoglobuliini).Tämä yhdiste toimii "erityisenä antigeeninä" seuraavassa vaiheessa.

2) Tässä vaiheessa muodostuminen on IR( immuunikompleksien) - välisen reaktion "spesifisen antigeenin" ja konjugaattia( tämän immunoglobuliini peroksidaasilla leimattua entsyymiä).Lisätään erityinen kromogeeni. Tämän seurauksena entsymaattisen reaktion on muodostumista värillisten aineiden kuoppiin, värin voimakkuus on riippuvainen määrästä potilaan immunoglobuliineja( vasta-aineita), joka sisältyy materiaaliin.

3) kauempana Tulkinta: fotometrisesti käyttäen monikanavaista spektrofotometriä verrataan optinen tiheys kokeen materiaalin optinen tiheys kontrollinäytteiden, matemaattinen käsittely tuloksia. Vasta-aineen määrä on potilaalle riippuu korkeus optinen tiheys kuoppiin.

yleinen käytäntö käyttää 96-kuoppalevyille.

määrä( tai pitoisuus) vasta-aineiden tiettyyn yksikköön tilavuus, kun optinen tiheys( OD) näytenesteen lasketaan. Sitten tulos verrataan kontrollinäytteen.

muistettava: jokaisen testausjärjestelmän kehitetään ottamaan huomioon yksilölliset tuloksia, suorituskyvyn standardit ja patologia( eli "viitearvo").Tämä tulee ottaa huomioon, kun arvioidaan tulokset kunkin tapaustutkimuksen. Tulkitsemaan oikein tulokset laboratorio "viitearvot" on toisesta laboratoriosta. On myös virheellistä vertailla tuloksia eri laboratorioissa yhdessä.Kun asetetaan

ELISA reaktioita ja on sellainen arvo, käsite kuten vasta-aine aviditeetti. Aviditeetti
vasta-aine - tämä vasta-aine antigeenin sitomiskyky ja antigeenin määrä sijaitsee keskinäisessä suhteessa immnoglobulinami( vasta-aineita).Avidity on suuri merkitys arvioitaessa väitettyä infektio termi, mikä on erittäin tärkeää diagnosoinnissa ensi-infektion raskauden aikana.

Basis vasta-avidity Testissä hoidossa immuuni- kompleksin( antigeeni-vasta-aine) urea Liuokseen, jossa tuhoamiseksi proteiinin. Vysokoavidnye yhteydet säilyvät ennallaan, ja alhainen aviditeetti tuhottu. Tulos annetaan aviditeetin indeksi, ilmaistuna prosentteina( %).

Mitä taudit havaitaan ELISA-diagnostiikka?

1. Tarttuvat taudit
1,1 Viral hepatiitti A( IgM, G), B-antigeenejä -HBsAg, HBeAg, vasta-aine - IgM HBcorAg Ig yhteensä HBcorAg, IgG HBeAg), C( vasta-aine-Ig M, G HCV), D( IgM,G), E( Ig M, G) ja muut.
1,2 HIV-infektio( IgG)
1,3 sytomegalovirus infektio( vasta-IgM, G)
1,4 Epstein-Barr-infektio tai mononkleoz( vasta-aine IgM, G EA, VCA, NA-proteiinit viruksen)
1,5 herpestulehdukset( vasta-aine IgM, G)
1,6 toksoplasmoosi( vasta-aine IgM, G)
1,7 vihurirokko( IgM, G)
1,8 tuhkarokko( IgM, G), luomistauti( IgM, G), pseudotuberculosis( IgM, G), salmonelloosi( IgM, G), shigelloosi tai punatauti(IgM, G), aspergilloosi( IgM, G), puutiaisaivotulehdusviruksesta, borrelioosi, ja monet muut.
1,9 parasitosis( Giardiaasi, toksokariaasi, trikinoosi, opistorhoz, ekinokokkoosin, alveococcosis ja muut), jossa todettiin IgG: tä
1,10 STD( sukupuolitaudit kautta) - mykoplasmoosin( IgM, G), Ureaplasmosis( IgM, G), Chlamydia( IgA, M, G), Kuppa( IgG)
1,11 helikobakteeri-infektion( IgG)

2. merkkiaineet autoimmuunisairaus ja ihmisen koskemattomuutta indeksit ( kokonais-IgE-, kokonais-IgG, yhteensä IgA, yhteensä IgM, yhteensä IgD, sekretorinen IgA, IgG-2, IgG4, CRC kiertävä immuunikompleksien, IgA- ja IgG-vasta-gliadiinin ja muut)

3. Onkologichsekie markkereita ( FNNoin - tuumorinekroositekijä, CEA - karsinoembryonaalinen antigeeni, PSA - eturauhasen spesifisen antigeenin, hCG - ihmisen koriongonadotropiini, CA 125, alveomutsin ja monet muut)

4. Lisääntymishäiriöt I( estradioli, progesteroni, prolaktiini, testosteronin, AFP AFP-FSH - follikkelia stimuloiva hormoni ja muut)

5. taudit kilpirauhasen( vapaan ja sitoutuneen T3, T4, tyroglobuliini kilpirauhasperoksidaasi - TPO, kilpirauhasta stimuloiva hormoni - TTG).

Tämä luettelo ei suinkaan ole kaikki sairaudet diagnosoidaan ELISA.

materiaali ELISA-analyysiin ja sääntö aita

Yleisin materiaali ELISA reaktiot - potilaan seerumissa, joka on otettu tyhjään vatsaan. Materiaali voi toimia myös aivo-selkäydinneste, lapsivesi, lasiaisen sisältö, lima kohdunkaulan kanava ja virtsaputken pyyhkäisynäytteitä.

valmistelu potilailla toimittamisesta materiaalin IFA

Verta otetaan tyhjään vatsaan. Ennen toimituksen verta ei tarvitse tehdä mitään huumeita. Erityistä hoitoa( viruksia torjuvia, Loisten ja niin edelleen) on lopetettava vähintään 2 viikkoa ennen tutkimusta.

valmistus IFA pvm

Entsyymi-immunomääritys suoritetaan nopeasti päivällä.Viivästykset voivat olla eri laboratorioissa tietyn määrän seerumien kertymisen vuoksi.

ELISA-diagnostiikan mahdolliset tulokset

Tiettyjen infektioiden tulosten arvioinnissa havaittujen vasta-aineiden luokka ja niiden määrä ovat tärkeitä.Se ei vaikuta ainoastaan ​​kysymys infektion etiologiassa( eli se tai ei), mutta arvioitu vaiheessa tauti( akuutti ja krooninen), sekä läsnä ollessa aktiivinen infektio( akuutti tai pahenemista krooninen) ajankohtana tutkimuksen.

Mitkä ovat vasta-aineiden likimääräiset termit( immunoglobuliinit-Ig)?

Aikaisimpia vasta-aineita ovat IgM .Tunnista ne voi olla 1-3 viikkoa mahdollisen infektion jälkeen, mikä luonnehtii infektioprosessin akuutti vaihe. Toinen tilanne, jossa esiintyy IgM-vasta-aineita, on kroonisen prosessin aktivaatio( tai paheneminen).IgM-vasta-aineet liikkuvat keskimäärin noin 3 kuukautta, sitten niiden määrä vähitellen katoaa. Kuitenkin joillakin potilailla IgM: n jäljellä olevat määrät voidaan havaita 1-2 vuoden kuluessa infektion ajankohdasta.

Nykyaikaiset testijärjestelmät ovat erittäin herkkiä, mikä johtaa epäspesifisiin vääriä positiivisiin tuloksiin( usein raskaana oleville naisille).Siksi tässä potilasryhmässä positiivinen IgM tulisi tarkistaa uudelleen!

-IgA-vasta-aineet esiintyvät 2-4 viikon kuluttua infektion jälkeen, mutta riittävän määrän havaitsemiseen - kuukaudessa. Seerumin IgA syntetisoida plasman solut pernassa, imusolmukkeissa ja limakalvon sekretorinen IgA konsentroitiin limakalvojen suorittaa sen suojaava tehtävä - mukana paikallisen immuniteetin.

4. viikosta tartunnan jälkeen -vasta-aineet IgG alkavat näkyä.Useimmissa infektioissa niiden titteri kasvaa vähitellen suurimmillaan eri aikoina( keskimäärin 1,5-2 kuukauden kuluttua), jolloin titteri pysyy alhaisella tasolla ja osoittaa immuniteetin. Joissain taudeissa( mykoplasmoosi, klamydia, trichomoniasis) IgG-taso ei ole korkea, on merkittävästi vähentynyt, koska ei ole immuniteetin näitä infektioita.

Erilaisten vasta-aineiden vasta-aineiden havaitsemisvaihtoehdot:

- IgM-vasta-aineiden eristetty havaitseminen edellyttää primäärisen
-infektion läsnäoloa.
- Samanaikainen havaitseminen veren IgM- ja IgG-ominaisuus
ensi-infektion edellisen 2-3 kuukautta, sekä pahenemista krooninen sairaus. Siksi raskauden aikana IgM-läsnäolo ei aina ole merkki ensisijaisesta infektiosta.
- eristetyn IgG: n havaitseminen voi osoittaa sekä immuniteettia taudille,
: lle että krooniselle infektiolle. Toisessa tilanteessa vasta-aineiden määrä( titteri) on myös tärkeä, ja muutos tässä tiitterissä on dynamiikassa. Yleensä tutkimukset suoritetaan 2-4-6 viikon välein.
- IgA: n tai IgM: n havaitseminen osoittaa primaarista infektiota.
: n kanssa IgA: n esiintyminen yhdessä IgG: n kanssa odotetaan aktivoivan kroonista infektiota( keskimäärin 2 viikkoa pahenemisajasta).

Määritelmä aviditeetti IgG-vasta-aineiden on erinomainen täydennys diagnoosin vaiheeseen ensisijainen tartunta pitkäaikainen infektio, joka on sen kliinistä merkitystä erityisesti arvioitaessa riskiä kohdunsisäinen sikiön tartuntaa. Alhaisen asteen IgG: n havaitseminen osoittaa primaarista infektiota ja se havaitaan keskimäärin 4-6 kuukautta infektion jälkeen, harvemmin pidempään. Pieni annos IgG vaatii muita laboratorion todisteita primaarisesta infektiosta( IgM).Korkea-vasta-aineet ovat joko merkki kroonisesta sairaudesta ja sen pahenemisesta tai muodostuneesta immuniteetista.

erityisesti pikkulapsilla: lapsilla alle vuoden, ja joskus jopa 1,5 vuoden veressä kiertävän äidin IgG erilaisille infektioille( eli ei ollut heidän tunkeutumista istukan kautta äidistä sikiöön kohdussa).Se ei sinänsä ole merkki infektioista nykyhetkessä.Jos samassa iässä todetaan IgM( muista, että äidin IgM ei pääse tunkeutumaan istukkaan), tämä on merkki kohdunsisäisestä infektiosta tai hankitusta infektiosta syntymän jälkeen.

Kvantitatiivinen ELISA-menetelmä

ELISA-diagnostiikan tulos( entsyymi-immunoanalyysin avulla) annetaan tietyissä yksiköissä:
- Näytteen optinen tiheys( OP) on spesifisten vasta-aineiden pitoisuus yksikkötilavuutta kohden. Mitä korkeampi OP-näyte, sitä korkeampi vasta-ainepitoisuus on. Jotkin tulokset viittaavat positiivisuuskertoimeen( KP) - tämä on myös näytteen optinen tiheys.
- Vasta-ainepitoisuuden yksiköt( nanogramma / millilitra tai ng / ml).
- seerumin tiitterit: 1:20, 1:40, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800, 1: 1200 ja niin edelleen. Diagnostiset titterit( joissa sairaus diagnosoidaan, ei infektiota) erilaisista sairauksista ovat erilaiset.
- Symbolien muodossa - "+", "-", "?"( +, ++, +++, ++++).
- Laadullinen arviointi, joka perustuu tiettyyn kriteeriin( positiivinen tai negatiivinen).

On oikein arvioida vasta-aineiden määrä, immunoglobuliinien luokkien havaitsemisen variantti ja siten altistaa taudin vaihe ja hoidon tarve vain lääkäri voi tehdä.

Ei pidä unohtaa, että millä tahansa testijärjestelmällä kehitetään niiden "vertailuarvoja"( normin muunnelmia) ylittäessä tämä ja tämä tauti tunnistetaan( patologiset variantit).Eri testijärjestelmissä "vertailuarvot" ovat erilaisia.

Dynaamisten ELISA-tulosten oikea vertailu on mahdollista vain, jos ne valmistetaan samassa laboratoriossa.

Lääkäri infektsionist Bykova N.I.