Imunoenzimska analiza( EIA) - vzroki, simptomi in zdravljenje. MF.

imunsko testom( ELISA) - sodobno laboratorijsko preiskavo, v katerem je iskanje počutje specifičnih protiteles ali antigenov v krvi na specifične bolezni prepoznati ne le etiologijo, temveč tudi fazo bolezni. Rezultate ELISA lahko dobimo kvalitativno in kvantitativno.

Trenutno EIA se uporablja v naslednjih primerih:

1) iskanje specifičnih protiteles proti kateri koli nalezljive bolezni;
2) iskanje antigenov vseh bolezni( nalezljivih, veneričnih);
3) pregled bolnikovega hormonskega stanja;
4) pregled za vodilnike;
5) pregled prisotnosti avtoimunskih bolezni. Prednosti

ELISA metoda:

1) z visoko specifičnost in občutljivost ELISA( nad 90%).
2) Sposobnost za določanje in spremljanje dinamike bolezenskega procesa, tj primerjanje količine protiteles v različnih časovnih intervalih.
3) Razpoložljivost diagnostike ELISA v kateri koli zdravstveni ustanovi. Relativno pomanjkanje

:

1) Dokaz imunskega odziva( protitelesa), ne pa patogena.

Koncepti

Pred pojasniti bistvo metode ELISA, na kratko je razumeti nekatere pojme.

Protitelesa( ali imunoglobuline - Ig) - specifični proteini, proizvedeni z B - limfociti
( imunskih celic) kot odziv na začetku telesa infekcioznega povzročitelja( virus, bakterije, glive, itd).Izločajo imunoglobulin( IgA), imunoglobulin E( IgE), imunoglobulin M( IgM), imunoglobulina G( IgG), imunoglobulin D( IgD).Te se med seboj razlikujejo in so molekulsko maso razpolovni čas udeležbe / nonparticipation v nalezljivih procesov, odkrivanje čas od trenutka okužbe.Če menimo, da je molekulsko maso, največ ga je IgM - je v pentamer( 950.000 Da), v nasprotju s preostalim Iga( od 150 na 200 000 Da), tako da IgM preprosto ne more skozi placento. Zato je odkrivanje IgM pri otroku, starem 1 leto, vedno znak okužbe pri plodu. Glavnina serumskih imunoglobulinov predstavlja IgG( 75-85%) in najnižja - IgE( 0.003%).Infekciozni Postopek neposredno vključeni pokazal samo IgA, M, G. IgE so znak alergijskih reakcij in pogojev, in IgD - mogoče odkriti le v bezgavkah in tonzil tkiva, igra pomembno vlogo pri nastanku lokalne imunosti.

razrede imunoglobulinov

Antigeni - visoko molekulsko maso organskih snovi, zlasti kužnih patogenov in drugih bolezni, kot tudi različne snovi spremenjenimi celicami, proizvedene v danem bolezni( avtoimunske bolezni, rak).

imunskim kompleksom - antigen-protitelo sodeluje v imunskem procesu. Na kaj temelji IFA metoda?

se več različnih sort ELISA( posredno, neposredno, metoda blokiranje prijavljenih), vendar v praksi najpogosteje uporablja heterogeno encimskim imunotestom ali ELISA( encimsko imunski test)

osnova za imunotestom imunskega odziva na antigen in protitelesa, da se tvori imunski kompleks: antigenbispecifična protitelesa, ki ima za posledico spremembo encimske aktivnosti posebnih oznak na površini protitelesa. Postopek

ELISA

preprost način, lahko ta proces je razdeljen na več faz:

1) na površini zdravnik luknjami plošče Preizkuševalec je očiščeni antigen specifičnih patogenov. Pri dodajanju biološkega materiala( krvnega seruma) pacienta posebnega reakcija pojavi med antigenom in želenega protitelesa( imunoglobulinov).Ta spojina bo v naslednjem koraku delovala kot "poseben antigen".

2) V tej stopnji Zanimiv je IR( imunskih kompleksov) - reakcijo med "specifični antigen" in konjugata( ta imunoglobulin označeni s encima peroksidaze).Dodamo poseben kromogen. Rezultat tega encimske reakcije je tvorba obarvane snovi v vdolbinico ploščice, katerega barva intenziteta odvisna od števila imunoglobulinov bolnikov( protitelesa), vsebovanih v materialu.

3) dalje tam pojasnilo: fotometrija z večkanalno spektrofotometra primerjanjem optične gostote testnega materiala z optično gostoto kontrolnih vzorcev, matematičnih rezultatov obdelave. Količina protiteles pri pacientu odvisen od višine optično gostoto vrtin.

običajna praksa, da uporabite 96 tudi plošče.

količina( ali koncentracijo) protiteles v določenem volumsko enoto pri merjenjem optične gostote( OD) tekočine vzorca se meri. Rezultat se nato primerja s kontrolnim vzorcem.

Treba je opozoriti: za vsak testni sistem razvit, da se upoštevajo rezultati individualni uspešnosti, standardi uspešnosti in patologije( tj "referenčna vrednost").To je treba upoštevati pri vrednotenju rezultatov vsako študijo primera. Pravilno interpretirati rezultate laboratorijskih "referenčne vrednosti" drugem laboratoriju. Prav tako je napačno primerjavo rezultatov iz različnih laboratorijev skupaj. Pri določanju

ELISA reakcije in ima vrednost tako koncept kot avidnostjo protiteles. Avidnosti
protitelo - to protitelo antigen vezavni trdnost in količina antigena, ki se nahajajo v medsebojni odnos z immnoglobulinami( protiteles).Lakomost je velikega pomena pri ocenjevanju domnevno okužbo izraza, kar je izjemno pomembno pri diagnozi primarne okužbe pri nosečnicah.

Podlaga Test avidnosti protitelo sestoji iz zdravljenja z imunskim kompleksom( antigen-protitelo) raztopino sečnine, da se uniči protein. Vysokoavidnye povezave ostati nedotaknjeno, in nizke avidnosti uničena. Rezultat je podan kot indeks avidnosti, izražen kot odstotek( %).

Katere bolezni se odkrijejo z ELISA diagnostiko?

1. infekcijske bolezni
1,1 Virusni hepatitis A( IgM, G), B antigenov -HBsAg, HBeAg, protitelesa - IgM HBcorAg, Ig skupno HBcorAg, IgG HBeAg), C( protitelesa Ig M, G HCV), D( IgM,G), E( Ig M, G) in drugi.
1,2 okužbo s HIV( IgG)
1,3 citomegalovirus okužbo( protitelesa IgM, G)
1,4 Epstein-Barr, okužba ali mononkleoz( IgM, G EA, VCA, NA proteine ​​virusa)
1,5 postherpetična okužb( IgM, G)
1,6 Toksoplazmoza( IgM, G)
1,7 rdečk( IgM, G)
1.8 ošpic( IgM, G), bruceloza( IgM, G), pseudotuberculosis( IgM, G), salmoneloza( IgM, G), šigeloze ali griže(IgM, G), aspergiloza( IgM, G), klopni encefalitis, borelioza, in mnogi drugi.
1,9 parasitosis( LAMBLIOZA, toksokariaza, trihineloza, opistorhoz, ehinokokoza, alveococcosis in drugi), pri kateri Zaznali IgG
1,10 SPB( spolno prenosljivih bolezni hrbet) - mikoplazmozo( IgM, G), Ureaplasmosis( IgM, G), Chlamydia( IgA, M, G), sifilis( IgG)
1,11 infekcija s Helicobacter( IgG)

2. Označevalci avtoimunskih bolezni in indeksa človekovega odpornost ( celotni IgE, skupaj IgG, skupaj IgA, skupaj IgM, skupaj IgD, sekretorni IgA, IgG 2, IgG4, CRC kroženje imunskih kompleksov, IgA in IgG protitelesa na gliadin in drugi)

3. Onkologichsekie označevalci ( FNO - tumorskega nekroznega faktorja, CEA - karcinoembrionski antigen, PSA - prostato specifičnega antigena, hCG - humani horionski gonadotropin, CA 125, alveomutsin in mnogi drugi)

4. reproduktivni motnje I( estradiol, progesteron, prolaktin, testosteron, AFP AFP-FSH - folikle stimulirajoči hormon in drugo)

5. bolezni ščitnice( prost in vezan T3, T4, tiroglobulin, ščitnice peroksidazo - TPO, ščitnico stimulirajočega hormona - TTG).

Ta seznam še zdaleč ni vse bolezni so bile ugotovljene z ELISA.

material za test ELISA analizo in pravilo ograja

Najpogostejši material, za ELISA reakcij - bolnikovem serumu, jemlje na prazen želodec. Material lahko služi tudi kot cerebrospinalni tekočini, amnijske tekočine, steklenih vsebine, sluzi za kanal materničnega vratu in uretre tamponov.

Priprava bolnikov za dobavo materiala za IFA

Kri se jemlje na prazen želodec. Pred dobavo krvi ne potrebujejo, da sprejmejo vse droge. Posebno zdravljenje( protibakterijsko, protivirusno, antiparazitik, itd) je treba nemudoma prekiniti vsaj 2 tedna pred študijo.

proizvodnjo IFA Datumi

Encimski imunološki preskus poteka hitro, čez dan. Zamude so lahko v različnih laboratorijih zaradi kopičenja določenega števila serumov. Možni rezultati

ELISA diagnostični

Pri ocenjevanju rezultatov na določenem okužbe je pomembno razreda protiteles, odkritih in njihovo število. To ne vpliva le na vprašanje o etiologiji okužbe( to pomeni, da ali ne), ampak je ocenjena stopnja bolezni( akutne in kronične), kakor tudi prisotnost aktivne okužbe( akutna ali poslabšanje kroničnega) v času raziskave.

Katere so približni čas protiteles( imunoglobulinov - Ig)?

Najzgodnejša protitelesa so IgM .Identificirati jih lahko 1-3 tedne po možni okužbi, ki označuje akutno fazo nalezljivega procesa. Drugi primer je nastanek protiteles IgM - aktiviranje( ali poslabšanje) kronični proces. Protitelesa IgM krožijo v povprečju približno 3 mesece, nato pa njihovo število postopoma izgine. Vendar pa je pri nekaterih bolnikih, sledeh IgM mogoče zaznati v 1-2 letih po okužbi.

moderno preskusni sistemi so zelo občutljivi, tako da so nespecifični lažne pozitivne rezultate( pogosto pri nosečnicah).Zato je treba v tej skupini bolnikov ponovno preveriti pozitivni IgM!

Protitelesa IgA pojavi 2-4 tednov po okužbi, ampak v zadostni količini za odkrivanje - mesec. Serum IgA sintetiziramo plazemskih celic vranice, bezgavk in sluznice sekretorni IgA koncentriramo na sluznico opravlja svojo zaščitno funkcijo - pri lokalni imunosti.

Na 4. teden po okužbi se pojavijo protiteles IgG .V večini okužb titer postopoma narašča, največ v različnih obdobjih( v povprečju 1,5-2 meseca), potem je titer ostala na nizki ravni in kaže na imuniteto. V nekaterih bolezni( mikoplazmoze, klamidija, Trihomonozo) IgG ni visoka, je znatno zmanjšala zaradi pomanjkanja imunitete v teh okužb. Izvedbeni

odkrivanje protiteles različnih razredov:

- izolirane IgM odkrivanje protiteles predpostavlja
primarno okužbo.
- hkratno odkrivanje krvi IgM in IgG značilno
primarni okužbi v preteklih 2-3 mesecih, kot tudi poslabšanje kroničnega bolezni. Zato v nosečnosti prisotnost IgM ni vedno znak primarne okužbe.
- Odkrivanje IgG izoliranega in lahko kažejo na odpornost na bolezni,
in kronične infekcije. V drugem primeru je nastavljena in količine protiteles( titer) in spremembe dinamike titer. Ponavadi se študije izvajajo v presledkih od 2-4 do 6 tednov.
- odkrivanje IgA izolirane ali z IgM označuje primarno okužbo. Ko
videz z IgG IgA domneva aktivacijo kronično okužbo( povprečje 2 tedna od trenutka poslabšanja).

Opredelitev avidnosti IgG protitelesa je odlično dopolnilo v fazi diagnoze primarne okužbe z dolgoletno okužbe, ki ima svoj klinični pomen, še posebej pri ocenjevanju tveganja v maternici okužbe ploda. Odkrivanje nizke avidnosti IgG kaže primarno okužbo in opredeljuje povprečno po 4-6 mesecih po okužbi, redko več.Nizki odmerek IgG zahteva druge laboratorijske dokaze o primarni okužbi( IgM).Visoke protitelesa avidnosti so bodisi znak kroničnih bolezni in akutne ali tvorjen imunitete.

še posebej pri dojenčkih: pri otrocih, mlajših od enega leta, in včasih celo 1,5 let v krvi, ki vozijo mater IgG protiteles, različne okužbe( to je bilo njihovo prodiranje skozi posteljico iz matere v zarodek v maternici).Sama po sebi ni znak okužbe v sedanjosti.Če pri starosti takjm odkrita IgM( spomnimo, da materina IgM prehaja skozi placento ne more), je to znak okužbe ali intrauterini okužbe, pridobljene po rojstvu.

Kvantitativna metoda ELISA

Rezultati diagnostike ELISA( s pomočjo encimskega imunološkega testiranja) so podani v nekaterih enotah:
- Optična gostota( OP) vzorca je koncentracija specifičnih protiteles na enoto prostornine. Višji je OP-vzorec, večja je koncentracija protiteles. Nekateri rezultati se nanašajo na koeficient pozitivnosti( KP) - to je tudi optična gostota vzorca.
- Enote koncentracije protiteles( nanogram / mililiter ali ng / ml).
- v serumu titer: 01:20, 01:40, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800, 1: 1200 in tako naprej. Diagnostični titri( na kateri je diagnozo bolezni, ne pa dejstvo okužbe) za več različnih bolezni.
- v obliki simbolov - "+", "-"( + ++ +++ ++++) «?«.
- V obliki kvalitativne ocene na podlagi določenega merila( pozitivnega ali negativnega).

pravilno oceniti količino protiteles variantnih imunoglobulinov identifikacije razreda, in, posledično, izpostavljajo fazo bolezni in potrebo po le zdravnik lahko zdravljenje.

ne smemo pozabiti, da je njihova "referenčna vrednost"( izvedbe norma), in nad katerim posebno diagnosticirali bolezen( variante patologijo) razvit za vsak testni sistem. Za različne testne sisteme so "referenčne vrednosti" drugačne.

Pravilno primerjavo rezultatov ELISA, delo v daljšem časovnem obdobju, je možno le v primeru njihove proizvodnje v istem laboratoriju.

Zdravnik infektsionist Bykova N.I.