Reacția în lanț a polimerazei
PCR - Descoperirile recente in genetica moleculara, folosite pentru a amplifica ADN-ul și vă permite să se propage rapid in vitro bucată specifică
a ADN-ului( de exemplu, orice genă de interes) este mai mult de 200 000 de ori. Pentru a realiza reacția, este suficient să existe materialul ADN al unei celule;cantitatea de ADN amplificată prin PCR este atât de mare încât acest ADN poate fi pur și simplu colorat( utilizând sonde radioactive după ce nu este necesară electroforeza).O condiție prealabilă pentru efectuarea PCR este cunoașterea secvenței nucleotidice a regiunii ADN amplificate pentru selectarea corectă a primerilor sintetizați artificial.
In prezent, PCR este un proces care are loc într-un singur tub și constând din cicluri repetitive de amplificare( reproducere, copie) ale secvențelor ADN specifice, în scopul de a obține un număr suficient de mare de copii care pot fi identificate prin electroforeză.Una dintre componentele principale ale reacției - „grunduri“ - sintetice oligonukleoti-dy constând din 20-30 baze de recoacere complementare „Site-uri“( zone)( conexiune) la porțiunea identificabilă a ADN-ului șablon.
PCR rulează automat într-un termostat programabil - termociclu( termociclu).ciclu în trei etape, în care se obțin replici porțiuni identificabile a ADN matriță, a fost repetat de 30-50 de ori, în conformitate cu un ciclu termic de program-ra predeterminat.În primul ciclu oligoprimer hibridizează cu ADN-ul matriță original, apoi( în ciclurile următoare) și moleculele de ADN nou sintetizate ca acumularea lor în amestecul de reacție. In acest ultim caz, sinteza ADN-ului nu se încheie din cauza modificărilor de temperatură, și la atingerea ADN-ul vannogo porțiunea de delimitare amplificată-polimerază, care determină mărimea regiunii de ADN nou sintetizat la termen de o nucleotidă.
Ca metodă de molecule de ADN obținute prin electroforeză detectarea, prin care separarea se realizează ampliconi de dimensiuni amplifi-materiale calificate( produse de amplificare).
Folosirea PCR poate examina direct localizarea mutației putativă sau situs polimorfic, precum și pentru a studia prezența oricăror alte caracteristici specifice de ADN.