Analisi immunoenzimatica( VIA): cause, sintomi e trattamento. MFs.

immunoenzimatico( ELISA) - moderna indagini di laboratorio, durante il quale la ricerca è in corso di anticorpi o antigeni specifici nel sangue per malattie specifiche per identificare non solo l'eziologia, ma anche lo stadio della malattia. I risultati di ELISA possono essere dati qualitativamente e quantitativamente.

Attualmente VIA si applica nei seguenti casi:

1) Ricerca per gli anticorpi specifici per ogni malattia infettiva;
2) antigeni di ricerca di tutte le malattie( malattie infettive, malattie veneree);
3) esame dello stato ormonale del paziente;
4) esame per i marcatori on-line;
5) test per la presenza di malattie autoimmuni. Vantaggi Metodo

ELISA:

1) elevata specificità e sensibilità di ELISA( oltre il 90%).
2) Capacità di determinare e monitorare la dinamica del processo di malattia, cioè confrontando la quantità di anticorpi in diversi intervalli di tempo.
3) ELISA disponibilità diagnostica in qualsiasi istituzione medica. La relativa mancanza

:

1) ricerca di una risposta immunitaria( anticorpi), ma non del patogeno.

Concetti

Prima di chiarire l'essenza del metodo ELISA, è brevemente capire alcuni concetti.
anticorpi( immunoglobuline o - Ig) - proteine ​​specifiche prodotte dai linfociti B -
( cellule del sistema immunitario) in risposta all'entrata in corpo di un agente patogeno infettiva( virus, batteri, funghi, ecc).Secernere immunoglobulina A( IgA), immunoglobulina E( IgE), immunoglobulina M( IgM), immunoglobulina G( IgG), immunoglobulina D( IgD).Essi differiscono fra loro e formano una massa molecolare emivita partecipazione / nonparticipation in processi infettivi, rilevano la temporizzazione dal momento dell'infezione. Se consideriamo il peso molecolare, la più lui è IgM - è un pentamero( 950.000 Da), in contrasto con il resto della Ig( 150-200 000 Da), in modo da IgM semplicemente non può passare attraverso la barriera placentare. Pertanto, la rilevazione di IgM in un bambino di 1 anno di vita è sempre un segno di infezione nel feto. La maggior parte di immunoglobuline sieriche è rappresentata IgG( 75-85%), e la più bassa - IgE( 0,003%).Il processo infettivo direttamente coinvolta prendendo solo IgA, M, G. IgE sono un segno di reazioni e condizioni allergiche, e IgD - può essere rilevata solo nel linfonodo e tessuto tonsillare, svolge un ruolo nella formazione di immunità locale.classi di immunoglobuline

antigeni - sostanze organiche ad alto peso molecolare, in particolare patogeni infettivi e altre malattie, così come diverse sostanze modificate cellule prodotte in una data malattia autoimmune( malattia, cancro).

Immune complesso - l'antigene-anticorpo coinvolti nel processo immunitario. Su cosa si basa il metodo IFA?

Diversi distinte varietà ELISA( , indiretto, metodo bloccando diretto concorrenti), ma in pratica più comunemente usati eterogenea immunoenzimatico o ELISA( Enzyme Linked saggio di immunoassorbimento) base

del saggio immunologico della risposta immunitaria dell'antigene e l'anticorpo per formare un complesso immune: antigeneanticorpi bispecifici, che si traduce in un cambio di attività enzimatica di segni specifici sulla superficie anticorpo. Il metodo ELISA

termini più semplici, questo processo può essere suddivisa in diverse fasi:

1) sulla superficie della piastra medico-foro, l'esaminatore è patogeno specifico antigene purificato. Quando si aggiunge il materiale biologico( siero) di una specifica reazione paziente avviene tra l'antigene e l'anticorpo desiderato( immunoglobuline).Questo composto agirà come "antigene speciale" nella fase successiva.

2) In questa fase di formazione è IR( immunocomplessi) - la reazione tra il "antigene specifico" e coniugato( puo immunoglobulina marcata con enzima perossidasi).Viene aggiunto un cromogeno speciale. Il risultato di questa reazione enzimatica è la formazione di sostanze colorate nei pozzetti della piastra, l'intensità del colore che dipende dal numero di immunoglobuline( anticorpi) paziente contenute nel materiale.

3) Inoltre vi Interpretazione: fotometria utilizzando uno spettrofotometro multicanale confrontando la densità ottica del materiale di prova con una densità ottica di campioni di controllo, elaborazione dei risultati matematici. La quantità di anticorpo nel paziente dipende dall'altezza della densità ottica dei pozzetti.

pratica comune utilizzare le piastre da 96 pozzetti.

quantità( o concentrazione) di anticorpi in una particolare unità di volume quando si misura la densità ottica( OD) del liquido campione viene calcolato. Il risultato viene poi confrontato con un campione di controllo.

deve ricordare: per ogni sistema di test sviluppato per tenere conto dei risultati di performance individuale, standard di prestazioni e patologia( cioè "valore di riferimento").Questo dovrebbe essere considerato nel valutare i risultati di ciascun caso di studio. Interpretare correttamente i risultati di un laboratorio di "valori di riferimento" un altro laboratorio. E 'anche corretto confrontare insieme i risultati di diversi laboratori. Quando si imposta reazioni

ELISA e ha un valore tale concetto come anticorpo avidità.Avidità
anticorpo - questo anticorpo la forza di legame di antigene e la quantità di antigene situato in interrelazione con immnoglobulinami( anticorpi).Avidità è di grande importanza nel valutare la presunta infezione del termine, che è estremamente importante per la diagnosi di infezione primaria in donne in gravidanza.

Basis test degli anticorpi di avidità si compone di trattamento del complesso immune( antigene-anticorpo) soluzione di urea al fine di distruggere la proteina.link Vysokoavidnye rimangono intatti, e bassa avidità distrutti. Il risultato è espresso come l'indice di avidità, espressa in percentuale( %).malattie

Quali sono rilevati da Elisa-diagnostica?

1. Le malattie infettive
1,1 virale epatite A( IgM, G), B antigeni -HBsAg, HBeAg, anticorpo - IgM HBcorAg, Ig totale HBcorAg, IgG HBeAg), C( anticorpo Ig M, G HCV), D( IgM,G), e( Ig M, G) e altri.
1.2 infezione da HIV( IgG)
1.3 citomegalovirus infezioni( IgM, G)
1.4 Epstein-Barr infezione o mononkleoz( anticorpo IgM, G EA, VCA, proteine ​​NA del virus)
1,5 infezioni erpetiche( anticorpo IgM, G)
1.6 toxoplasmosi( anticorpo IgM, G)
1.7 Rubella( IgM, G)
1.8 morbillo( IgM, G), brucellosi( IgM, G), pseudotuberculosis( IgM, G), salmonellosi( IgM, G), Shigellosi o dissenteria(IgM, G), aspergillosi( IgM, G), encefalite, borreliosi, e molti altri zecche.
1.9 parassitosi( giardiasi, toxocariasi, trichinosi, opistorhoz, echinococcosi, alveococcosis e altri) in cui il rilevato IgG
1.10 STD( malattie sessualmente trasmesse attraverso) - micoplasmosi( IgM, G), Ureaplasmosis( IgM, G), Chlamydia( IgA, M, G), sifilide( IgG)
1.11 infezione da Helicobacter( IgG)

2. Marcatori di malattie autoimmuni e indici immunità umana ( totale IgE, IgG totali, totale IgA, totale IgM, totale IgD, secretoria IgA, IgG 2, IgG4, CRC circolanti complessi immuni, IgA e IgG anticorpi alla gliadina e altri)

3. marcatori Onkologichsekie ( FNA proposito - il fattore di necrosi tumorale, CEA - dell'antigene carcinoembrionario, PSA - antigene prostatico specifico, hCG - gonadotropina corionica umana, CA 125, alveomutsin e molti altri)

4. disturbi riproduttivi I( estradiolo, progesterone, prolattina, testosterone, AFP AFP-FSH - ormone follicolo stimolante e altri)

5. Malattie tiroide( T3 libera e legata, T4, tiroglobulina, perossidasi tiroidea - TPO, ormone stimolante la tiroide - TTG).

Questa lista non è affatto tutte le malattie sono diagnosticate mediante ELISA.materiale

per ELISA analisi e regola recinzione

materiale più comune per reazioni ELISA - siero del paziente, presa a stomaco vuoto. Il materiale può anche servire come fluido cerebrospinale, fluido amniotico, contenuti vetrosi, muco delle cervicale canale e uretrali tamponi. Preparazione pazienti

per la consegna di materiale per IFA

sangue viene prelevato a stomaco vuoto. Prima della consegna di sangue non hanno bisogno di prendere tutte le droghe. Trattamento specifico( antibatterico, antivirale, antiparassitaria, e così via) deve essere fermato almeno 2 settimane prima dello studio.

produzione di IFA Date

Il dosaggio immunoenzimatico viene eseguito rapidamente durante il giorno. I ritardi possono essere in diversi laboratori a causa dell'accumulo di un certo numero di sieri.

Possibili risultati della diagnostica ELISA

Quando si valutano i risultati per infezioni specifiche, la classe di anticorpi rilevati e il loro numero sono importanti. Essa non riguarda solo la questione della eziologia della infezione( vale a dire o no), ma la fase di stima della malattia( acuta e cronica), così come la presenza di infezione attiva( acuta o esacerbazione della cronica) al momento dell'indagine.

Quali sono i termini approssimativi per la comparsa di anticorpi( immunoglobuline-Ig)?

I primi anticorpi sono IgM .Identificarli possono essere 1-3 settimane dopo l'eventuale infezione, che caratterizza la fase acuta del processo infettivo. La seconda situazione con la comparsa di anticorpi IgM è l'attivazione( o esacerbazione) del processo cronico. Gli anticorpi IgM circolano in media circa 3 mesi, quindi il loro numero scompare gradualmente. Tuttavia, in alcuni pazienti, tracce di IgM possono essere rilevate entro 1-2 anni dal momento dell'infezione.

I moderni sistemi di test sono altamente sensibili, con risultati falsi positivi non specifici( spesso in donne in gravidanza).Pertanto, in questo gruppo di pazienti, le IgM positive dovrebbero essere ricontrollate! Anticorpi IgA

appaiono 2-4 settimane dopo l'infezione, ma in quantità sufficiente per il rilevamento - in un mese. Siero IgA sintetizzato dalle cellule plasmatiche della milza, linfonodi e IgA secretorie mucose concentrati sulle mucose di svolgere la sua funzione protettiva - coinvolti nella immunità locale.

Dalla 4a settimana dopo l'infezione iniziano a comparire anticorpi IgG .Nella maggior parte delle infezioni, il loro titolo aumenta gradualmente con un massimo in tempi diversi( in media dopo 1,5-2 mesi), quindi il titolo rimane a un livello basso e indica l'immunità.Con alcune malattie( micoplasmosi, clamidia, tricomoniasi), il livello di IgG non è elevato, diminuisce sostanzialmente a causa della mancanza di immunità in queste infezioni.rilevazione realizzazioni

di anticorpi di diverse classi:

- isolato rilevazione di anticorpi IgM presuppone infezione primaria
.
- rilevazione simultanea di IgM e IgG nel sangue caratteristica infezione primaria
negli ultimi 2-3 mesi, così come esacerbazione della malattia cronica. Pertanto, in gravidanza, la presenza di IgM non è sempre un segno di infezione primaria.
- Il rilevamento di IgG isolate può indicare sia l'immunità alla malattia,
e infezione cronica. Nella seconda situazione, anche il numero di anticorpi( titolo) è importante, e il cambiamento in questo titolo è in dinamica. Di solito, gli studi vengono condotti ad intervalli di 2-4-6 settimane.
- Il rilevamento di IgA isolate o con IgM indica un'infezione primaria. Con
, si prevede che l'aspetto di IgA insieme a IgG attivi l'infezione cronica( in media 2 settimane dopo l'esacerbazione).anticorpi IgG

Definizione avidità è un eccellente complemento alla fase diagnosi di infezione primaria da un'infezione di lunga data che ha il suo significato clinico, in particolare al momento di valutare il rischio di infezione intrauterina del feto. La rilevazione di IgG di basso grado indica un'infezione primaria e viene rilevata in media 4-6 mesi dopo l'infezione, meno spesso di più.Le IgG a basso dosaggio richiedono altre prove di laboratorio di infezione primaria( IgM).Gli alti anticorpi sono o un segno di una malattia cronica e il suo peggioramento, o di un'immunità formata.

soprattutto nei bambini: in bambini sotto un anno, e talvolta anche 1,5 anni nel sangue circolante anticorpi IgG materni a varie infezioni( ad esempio, c'era la loro penetrazione attraverso la placenta dalla madre al feto in utero).Non è di per sé un segno di infezione nel presente. Se alla stessa età si riscontrano IgM( ricordare che le IgM materne non possono penetrare nella placenta), allora questo è un segno di infezione intrauterina o infezione acquisita dopo la nascita. Metodo quantitativo ELISA

Il risultato della diagnostica ELISA( con l'aiuto di un saggio immunoenzimatico) viene fornito in alcune unità:
- La densità ottica( OP) del campione è la concentrazione di anticorpi specifici per unità di volume. Più alto è il campione OP, maggiore è la concentrazione di anticorpi. Alcuni risultati si riferiscono al coefficiente di positività( KP) - questa è anche la densità ottica del campione.
- Unità di concentrazione anticorpale( nanogrammo / millilitro o ng / ml).
- Sotto forma di titoli di siero: 1:20, 1:40, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800, 1: 1200 e così via. I titoli diagnostici( in cui viene diagnosticata la malattia, e non il fatto dell'infezione) per diverse patologie sono diversi.
- Sotto forma di simboli - "+", "-", "?"( +, ++, +++, ++++).
- Nella forma di una valutazione qualitativa basata su un determinato criterio( positivo o negativo).

È corretto stimare il numero di anticorpi, la variante della rilevazione di classe delle immunoglobuline e, di conseguenza, di esporre lo stadio della malattia e il bisogno di trattamento può essere fatto solo da un medico.

Non va dimenticato che per qualsiasi sistema di test vengono sviluppati i loro "valori di riferimento"( varianti della norma), quando si supera la diagnosi di una o di un'altra malattia( varianti patologiche).Per i diversi sistemi di test, i "valori di riferimento" sono diversi.

Un confronto corretto dei risultati ELISA ottenuti in dinamica è possibile solo se sono fabbricati nello stesso laboratorio.

Medico infektsionista Bykova N.I.