Bakterijska analiza sputuma
Pravovremena identifikacija infektivnog agensa vrlo je važna za pravilan odabir antibakterijskog lijeka kako bi se spriječio razvoj bakterijskog otpora tijekom empirijskog davanja antibiotika. Gram bojanje je najčešća metoda bojenja svih vrsta materijala dobivenih od pacijenta( sputuma, bronhijalni krvarenje itd.), Za brzu i indikativnu uspostavu zaraznog agensa.
Ispitivanje sputuma obojen s mrljom Gram koristi se za preliminarnu procjenu mogućeg etiološkog sredstva. Ispitivanje sputuma s mrljama u gramu ispituje se prije nego što je sjemena na hranjive tvari također u svrhu procjene prikladnosti za kultiviranje i identifikaciju vjerojatnog patogena. Sputum se smatra prikladnim ako se mrlja od Gram-a obojena malim povećanjem mikroskopa otkriva više od 25 leukocita i manje od 10 epitelnih stanica na vidnom polju. Znakovi kvalitetnog uzorka sputuma koji se mogu koristiti za uzgoj su prevalencija leukocita na epitelnim stanicama u njoj, kao i prisutnost bakterija jedne vrste koje se nalaze unutar ili oko leukocita. Gram-pozitivne bakterije u preparatu imaju tamno plavu boju, gram-negativnu - u ružičastoj boji. Uzročnici atipične pneumonije( mikoplazma, legionella, rickettsia i klamidija) nisu obojeni Gram-om, pa se za njihovu detekciju koriste serološke metode.
Sputum testovi prema Tsiol-Nielsen koriste se za identifikaciju kiselih bacila, prije svega mycobacterium tuberculosis. Pripravak je pripremljen od purulentnih čestica sputuma, koje su odabrane između 4-6 različitih mjesta. Odabrane čestice pažljivo su triturirane između dva klizača do homogene mase, sušene u zraku, fiksirane preko plamena plamenika. Mycobacterium tuberculosis je obojena crvenom bojom, sve ostalo sputuma i bakterije u plavom. Mycobacterium tuberculosis ima izgled tankih, malo zakrivljenih štapova različitih duljina, zadebljanjem na krajevima ili u sredini, raspoređeni u skupinama i pojedinačno. Detekcija Mycobacterium tuberculosis je najpouzdaniji znak tuberkuloznih lezija pluća. Način bojenja mrlja prema Tsiol-Nielsenu s aktivnim oblicima plućne tuberkuloze ima osjetljivost od 50% i specifičnost od 80-85%.