Análisis del polimorfismo de la longitud del fragmento de restricción
El amplio uso de diversas endonucleasas de restricción para el análisis de ADN cromosómico reveló una gran variabilidad en el genoma humano. Incluso pequeños cambios en las regiones codificadoras y reguladoras de los genes estructurales pueden conducir a la terminación de la síntesis de una proteína determinada o a la pérdida de su función en el cuerpo humano, que generalmente afecta el fenotipo del paciente. Sin embargo, aproximadamente el 90% del genoma humano consiste en secuencias no codificantes que son más variables y contienen muchas de las denominadas mutaciones o polimorfismos neutros, y no tienen una expresión fenotípica. Tales sitios polimórficos( loci) se usan en el diagnóstico de enfermedades hereditarias como marcadores genéticos. Los loci polimórficos están presentes en todos los cromosomas y están vinculados a un sitio específico del gen
.Una vez determinada la localización del locus polimórfico, es posible establecer con qué genoma se asocia una mutación que causó la enfermedad en el paciente.
Para aislar regiones polimórficas de ADN, se utilizan enzimas bacterianas, enzimas de restricción, cuyo producto son sitios de restricción. Las mutaciones espontáneas que ocurren en sitios polimórficos las hacen resistentes o, por el contrario, sensibles a la acción de una enzima de restricción específica.
La variabilidad mutacional en sitios de restricción se puede detectar cambiando la longitud de los fragmentos de ADN restringidos, separándolos mediante electroforesis y posterior hibridación con sondas de ADN específicas. En ausencia de restricción en un sitio polimórfico, se detectará un fragmento grande en los electroforegramas, y si está presente, estará presente un fragmento más pequeño. La presencia o ausencia de un sitio de restricción en los loci idénticos de los cromosomas homólogos permite etiquetar de manera fiable el gen mutante y el normal y rastrear su transmisión a la descendencia. Por lo tanto, en el estudio de ADN de pacientes, en ambos cromosomas, de los cuales está presente un sitio de restricción en la región polimórfica, se detectarán fragmentos cortos de ADN en el electróforo. En pacientes homocigotos para una mutación que modifica un sitio de restricción polimórfica, se detectarán fragmentos de mayor longitud, y en fragmentos heterocigóticos se detectarán fragmentos cortos y largos.