Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης
PCR - Πρόσφατες πρόοδοι στη μοριακή γενετική, χρησιμοποιούνται για την ενίσχυση του DNA και σας επιτρέπει να διαδίδονται γρήγορα in vitro
συγκεκριμένο κομμάτι του DNA( δηλ, οποιοδήποτε γονίδιο που μας ενδιαφέρει) είναι πάνω από 200 000 φορές.Για να διεξαχθεί η αντίδραση, αρκεί να έχουν περιεκτικότητα DNA ενός κυττάρου?ο αριθμός των ενισχυμένων PCR ϋΝΑ είναι τόσο μεγάλη, ώστε το DNA μπορεί απλά να είναι βαμμένα( χρήση ραδιενεργών ανιχνευτών μετά από ηλεκτροφόρηση δεν απαιτείται).Απαραίτητη προϋπόθεση για την PCR - γνώση της νουκλεοτιδικής αλληλουχίας της ενισχυμένης περιοχής του ΟΝΑ για την ορθή επιλογή των τεχνητά δημιουργημένη εκκινητών-μερή.
Επί του παρόντος, η PCR είναι μια διαδικασία που λαμβάνει χώρα σε ένα μονό σωλήνα και αποτελείται από επαναλαμβανόμενες κύκλους ενίσχυσης( αναπαραγωγή, αντιγραφή) των ειδικών αλληλουχιών DNA προκειμένου να ληφθεί ένα αρκετά μεγάλο αριθμό αντιγράφων που μπορούν να ταυτοποιηθούν με ηλεκτροφόρηση.Ένα από τα βασικά συστατικά της αντίδρασης - «εναρκτήρες» - συνθετικές oligonukleoti-DY που αποτελείται από 20-30 βάσεων συμπληρωματικών «Sites»( περιοχές) ανόπτηση( σύνδεση) με τον προσδιορίσιμο τμήμα του DNA εκμαγείου.
PCR πραγματοποιείται αυτόματα σε ένα προγραμματιζόμενο θερμοστάτη - θερμοκυκλωτή( θερμοκυκλοποιητή).Τρεις-βήμα κύκλου στην οποία τα αντίγραφα λαμβάνονται αναγνωρίσιμα τμήμα του DNA εκμαγείου, επαναλήφθηκε 30-50 φορές σύμφωνα με ένα προκαθορισμένο πρόγραμμα θερμικό κύκλο-ra.Στον πρώτο κύκλο ολιγοπριμοδότη υβριδοποιούνται με το αρχικό DNA εκμαγείο, και στη συνέχεια( σε επόμενους κύκλους) και των προσφάτως συντιθέμενα μόρια DNA ως συσσώρευση τους στο μείγμα αντίδρασης.Στην τελευταία περίπτωση, η σύνθεση του DNA δεν τελειώνει λόγω των αλλαγών της θερμοκρασίας, και μετά την επίτευξη του πολυμεράση-ενισχυμένο vannogo τμήμα ορίου DNA, η οποία καθορίζει το μέγεθος της νεοσυντιθέμενο DNA περιοχής με ακρίβεια ένα νουκλεοτίδιο.
Ως μέθοδο ανίχνευσης μορίων DNA που λαμβάνεται χρησιμοποιώντας ηλεκτροφόρηση, με την οποία ο διαχωρισμός διεξάγεται ενισχυτής-υλικό-ειδικούς μεγέθους αμπλικόνια( προϊόντα ενίσχυσης).
Χρησιμοποιώντας PCR μπορεί να εξετάσει άμεσα εντόπιση πιθανής μεταλλάξεως ή πολυμορφική θέση, καθώς και να μελετηθεί η παρουσία τυχόν άλλων ειδικών χαρακτηριστικών DNA.