Polymerasekædereaktion
PCR - Nylige fremskridt i molekylær genetik, anvendes til amplifikation af DNA og gør det muligt hurtigt udbrede in vitro
specifikt stykke DNA( dvs. ethvert gen af interesse) større end 200 000 gange. For at udføre reaktionen er det tilstrækkeligt at have DNA-materialet i en celle;mængden af DNA amplificeret ved PCR er så stor, at dette DNA simpelthen kan farves( ved anvendelse af radioaktive prober efter elektroforese er ikke påkrævet).En forudsætning for at udføre PCR er kendskabet til nukleotidsekvensen af det amplificerede DNA-område til det korrekte valg af kunstigt syntetiserede primere.
øjeblikket PCR er en proces, der forekommer i et enkelt rør, og som består af gentagne cyklusser af amplifikation( reproduktion, kopiere) af specifikke DNA-sekvenser for at opnå et tilstrækkeligt stort antal kopier, der kan identificeres ved elektroforese. En af de vigtigste komponenter i reaktionen - "primere" - syntetisk oligonukleoti-dy bestående af 20-30 baser af komplementære "Sites"( områder) annealing( forbindelse) til identificerbar del af template-DNA'et.
PCR kører automatisk i en programmerbar termostat - termocykler( termocykler).Tre-trinscyklusen, som resulterer i replikaer af den identificerbare del af template-DNA'et, gentages 30-50 gange i overensstemmelse med det forudindstillede program for den termiske cykler. I den første cyklus hybridiserer oligopramerne med det originale skabelon-DNA og derefter( i efterfølgende cykler) og med de nyligt syntetiserede DNA-molekyler, som de akkumulerer i reaktionsblandingen. I sidstnævnte tilfælde har DNA-syntese ikke ende grund af temperaturændringer, og ved opnåelse af DNA-polymerase-amplificeret vannogo grænsedel, der bestemmer størrelsen af det nyligt syntetiserede DNA-region til inden ét nukleotid.
Som en fremgangsmåde til detektion af DNA-molekyler opnået ved anvendelse af elektroforese, hvorved separationen udføres forstærker,-materiale-faglært størrelse amplikoner( amplifikationsprodukter).
anvendelse af PCR kan direkte undersøge lokalisering putative mutation eller polymorfe sted, samt at undersøge tilstedeværelsen af eventuelle andre DNA specifikke funktioner.