Бактериоскопија спутума
Правовремена идентификација заразног средства је веома важна за правилан избор антибактеријског лека како би се спречило развој бактеријске отпорности током емпиријске примјене антибиотика.Бојење грама је најчешћи метод за бојење свих врста материјала добијених од пацијента( спутума, бронхиалвеоларног испирања, итд.), За брзо и индикативно успостављање заразног средства.
Размак спутума обојен бојом Грам се користи за обављање прелиминарне процене могућег етиолошког агенса.Испитивање мрље обојеног грама са мрком пре сјећења на хранљивим медијима такође у сврху процјене погодности за култивацију и идентификације вјероватног патогена.Спутум се сматра погодним ако се у мрљу обојеном Грамом уз мало повећање микроскопа открије више од 25 леукоцита и мање од 10 епителних ћелија у видном пољу.Знаци квалитетног узорка спутума који се могу користити за култивацију су преваленција леукоцита преко епителних ћелија у њој, као и присуство бактерија једне врсте која се налази унутар или око леукоцита.Грам-позитивне бактерије у припреми имају тамно плаве боје, грам-негативне - у розе.Узрочни агенси атипичне пнеумоније( микоплазма, легионела, рицкеттсиа и кламидија) Грам није обојен, због чега се користе серолошке методе за њихово откривање.
Размере спутума према Тсиол-Ниелсен-у служе за идентификацију ацид-фаст бацилли, пре свега микобактерије туберкулозе.Припрема се припрема из гнојних честица спутума, који су изабрани од 4-6 различитих места.Одабране честице пажљиво су тритуриране између 2 слајдова до хомогене масе, осушене у ваздуху, фиксиране преко пламена горионика.Мицобацтериум туберцулосис је обојена црвеном бојом, сви остали спутум и бактерије у плавој боји.Мицобацтериум туберцулосис има изглед танких, благо закривљених штапова разних дужина, са задебљањем на крајевима или у средини, распоређени су у групе и појединачно.Откривање Мицобацтериум туберцулосис је најпоузданији знак туберкулозних лезија плућа.Поступак очаравања узорака према Тсиол-Ниелсен активним облицима плућне туберкулозе има сензитивност од 50% и специфичност од 80-85%.