Karioting
Za študij kromosomov se najpogosteje uporabljajo kratkotrajni preparati krvne kulture, kot tudi celice kostnega mozga in kulture fibroblasta. Krv, ki se v laboratorij dodaja antikoagulantu, se centrifugira za precipitacijo rdečih krvničk in leukociti inkubirajo v kulturi med 2-3 dni. V krvni vzorec se doda phytohemag-glutinin, saj pospešuje aglutinacijo eritrocitov in spodbuja razdelitev limfocitov. Najbolj primerna faza za preučevanje kromosomov je metafaza mitoze, zato se kolhicin uporablja za preprečitev delitve limfocitov v tej fazi. Dodajanje tega zdravila k kulturi vodi k povečanju deleža celic, ki so v metafazi, to je na tej stopnji celičnega cikla, ko so kromosomi najbolje vidni. Vsak kromosom ponavlja( proizvaja svojo kopijo) in po ustrezni barvi je viden v obliki dveh kromatidov, pritrjenih na centromere ali osrednje zožitve. Celice nato obdelamo s hipotonično raztopino natrijevega klorida, fiksno in obarvano.
Za barvanje kromosomov se pogosteje uporablja barvilo Romanovsky-Giemsa, 2% acetaminomina ali 2% acetazarina. V celoti, enakomerno obarvajo kromosome( rutinska metoda) in jih lahko uporabimo za identifikacijo numeričnih anomalij človekovih kromosomov.
Za pridobitev podrobne slike o strukturi kromosomov, identifikaciji( določanju) posameznih kromosomov ali njihovih segmentov se uporabljajo različne metode diferencialnega barvanja. Najpogosteje uporabljane metode so Giemsa, kot tudi G- in Q-upogibanje. Ko je mikroskopska priprava
vzdolž dolžine kromosoma razkrila serijo obarvanih( heterochromatin) in neobesavljenih( evhromatinskih) pasov. Narava prečnega prečnega traku, pridobljena na ta način, omogoča identifikacijo vsakega kromosoma v množici, ker sta zamenjava črt in njihova velikost strogo individualna in konstantna za vsak par.
rata vzdolž dolžine kromosoma razkriva vrsto obarvanih( heterochromatin) in neobesavljenih( evhromatinskih) pasov. Narava prečnega prečnega traku, pridobljena na ta način, omogoča identifikacijo vsakega kromosoma v množici, ker sta zamenjava črt in njihova velikost strogo individualna in konstantna za vsak par.
Sl. Shematski zemljevidi človeških kromosomov z diferencialno obarvanostjo
Sl. Shematski zemljevidi človeških kromosomov z različno obarvanostjo
metafaznih plošč posameznih celic se fotografirajo. Posamezni kromosomi so izrezani iz fotografij in narejeni na list papirja;Takšna slika kromosomov se imenuje kariotip.
Uporaba dodatnega obarvanja in nove metode za pridobivanje kromosomskih zdravil, ki omogočajo raztezanje kromosomov v dolžini, znatno povečajo natančnost citogenetske diagnostike.
Za opis človeškega karyotipa je bila razvita posebna nomenklatura. Normalni kariotip moškega in ženske je označen kot 46, XY in 46, XX.V Downovem sindromu, ki ga zaznamuje prisotnost dodatnega kromosoma 21( trisomija 21), je ženski kariotip opisan kot 47, XX 21 + in moški - 47, XY, 21+.V prisotnosti strukturne anomalije kromosoma je treba navesti spremenjeno dolgo ali kratko roko: črka p pomeni kratko roko, q dolga roka in t translokacijo. Tako, ko se črta kratka roka kromosoma 5( sindrom "cat-scream"), je ženski kariotip opisan kot 46, XX, 5p-.Mati otroka s translokacijo Downov sindrom - nosilec uravnotežene translokacije 14/21 ima kariotip 45, XX, t( 14q, 21q).Kromosom translokacije se tvori, ko se dolgi kraki kromosoma 14 in 21 združita, kratka ramena pa se izgubita.
Vsako ramo je razdeljeno na okrožja, nato pa na segmente, tiste in druge pa so označene z arabskimi številkami. Centromera kromosoma je izhodišče za štetje regij in segmentov.
Tako se za kromosomsko topografijo uporabljajo štirje označevalci: število kromosomov, simbol rame, številka območja in številka segmenta v določeni regiji. Na primer, snemanje 6p21.3 pomeni, da je kromosom šestega para, njegovo kratko ramo, območje 21, segment 3. Obstajajo dodatni simboli, zlasti pter - konec kratke roke, qter - konec dolge roke.
Citogenetska metoda preiskave omogoča zaznavanje delecij in drugih sprememb kromosomov le v velikosti približno 1 milijona baz( nukleotidov).