Kariotipavimas
Dažniausiai naudojamos chromosomos, trumpalaikės kraujo kultūros preparatai, kaulų čiulpų ląstelės ir fibroblastų kultūros. Kraujas, tiekiamas laboratorijai antikoaguliantu, centrifuguojamas raudonųjų kraujo kūnelių nusėdimui, o leukocitai kultūrų terpėje 2-3 dienas inkubuojami. Fitohemag-glutininas pridedamas prie kraujo mėginio, nes jis pagreitina eritrocitų agliutinaciją ir stimuliuoja limfocitų suskaidymą.Tinkamiausias chromosomų tyrimo etapas yra mitozės metafazė, todėl kolchicinas šiuo etapu sustabdo limfocitų suskaidymą.Pridedant šį vaistą į kultūrą, ląstelių, kurios yra metafazėje, ty toje ląstelės ciklų stadijoje, padidėjimas, kai geriausiai matomos chromosomos. Kiekviena chromosoma pakartoja( gamina savo kopiją) ir po atitinkamos spalvos matoma dviem chromatidais, pritvirtintomis prie centromerio arba centrinės susiaurėjimo. Po to ląstelės apdorojamos hipotoniniu natrio chlorido tirpalu, fiksuotos ir dažomos.
Dažant chromosomas dažniau naudojamas Romanovskio-Giemso dažiklis, 2% acetaminominas arba 2% acetazarinas. Jos visiškai ir vienodai traukia chromosomas( įprastas būdas) ir gali būti naudojamos žmogaus chromosomų skaitmeninėms anomalijoms nustatyti.
Norėdami gauti išsamią charakteristiką apie chromosomų struktūrą, atskirų chromosomų ar jų segmentų identifikavimą( identifikavimą), naudojami įvairūs diferencialinio dažymo metodai. Dažniausiai naudojami metodai yra Giemsa, taip pat G- ir Q-lenkimas. Kai mikroskopinis preparatas-
yra išilgai chromosomos ilgio, atskleidžiama serija dažytų( heterochromatino) ir nepaaiškintų( euchromatino) juostų.Tokiu būdu gaunamas skersinio juostos pobūdis leidžia nustatyti kiekvieną chromosomą rinkinyje, nes juostų pakitimai ir jų dydžiai kiekvienai porai yra griežtai individualūs ir pastovūs.
greta chromosomos ilgio atskleidžia daugybę dažytų( heterochromatino) ir nedažytų( euchromatino) juostų.Tokiu būdu gaunamas skersinio juostos pobūdis leidžia nustatyti kiekvieną chromosomą rinkinyje, nes juostų pakitimai ir jų dydžiai kiekvienai porai yra griežtai individualūs ir pastovūs.
Fig.Žmogaus chromosomų schema su
diferencijuota spalva. Pav. Fotografuojami atskirų ląstelių metafazių plokščių
atskirų žmogaus chromosomų įvairaus spalvų schemos žemėlapiai. Individualios chromosomos išpjauti iš nuotraukų ir įklijuoti ant popieriaus lapo;toks chromosomų paveikslas vadinamas kariotipu.
Naudojant papildomą dažymą, taip pat naujus metodus chromosomų medikamentams gauti, kurie leidžia ilginti chromosomų ilgį, žymiai padidina citogenetinės diagnostikos tikslumą.
Sukurta speciali nomenklatūra žmogaus kariotipo apibūdinimui.Įprastas kariotipas vyrams ir moterims yra atitinkamai 46, XY ir 46, XX.Į Dauno sindromą, kuriam būdinga papildoma 21 chromosoma( trisomija 21), moterų kariotipas apibūdinamas kaip 47, XX 21 +, o vyrams - 47, XY, 21+.Esant chromosomos struktūrinei anomalijai, reikia nurodyti pakeistą ilgą ar trumpą ranką: raidė p reiškia trumpą ranką, q ilgą ranką ir t - perkėlimą.Taigi, kai ištrinama trumpoji chromosomos 5 sindromas( "kačių šūksnio" sindromas), moters kariotype yra apibūdinama kaip 46, XX, 5p-.Vaiko motina su translokacija Dauno sindromas - subalansuoto 14/21 perkėlimo nešiklis yra 45, XX, t( 14q; 21q) kariotipas. Translokacijos chromosoma susidaro, kai ilgos chromosomos 14 ir 21 sujungimo rankos sulaužomos, trumpi pečiai prarandami.
Kiekvienas pečių skirstomas į rajonus, o jie savo ruožtu - į segmentus, o tie ir kiti yra žymimi arabišku skaičiais. Chromosomos centromeris yra atskaitos taškas regionams ir segmentams skaičiuoti.
Taigi, keturi žymekliai naudojami chromosomų topografijai: chromosomų skaičius, pečių simbolis, ploto numeris ir segmento numeris tam tikrame regione. Pavyzdžiui, įrašas 6p21.3 reiškia, kad tai yra šeštosios poros chromo bazė, jos trumpoji pele, 21 plotas, 3 segmentas. Yra ir papildomų simbolių, ypač pter - trumpos rankos galas, qter - ilgosios rankos galas.
Citogenezinis tyrimo metodas leidžia aptikti delecijas ir kitus chromosomų pokyčius tik maždaug 1 milijono bazių( nukleotidų) dydžiu.