Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης στη διάγνωση μολυσματικών ασθενειών

PCR - μία από τις μεθόδους για διαγνωστική DNA επιτρέπει την αύξηση του αριθμού των αντιγράφων ενός ανιχνεύσιμου τμήματος του γονιδιώματος( DNA) των βακτηρίων ή ιών είναι ένα εκατομμύριο φορές χρησιμοποιώντας ένα ένζυμο πολυμεράσης DNA.Μια δοκιμή για αυτό το συγκεκριμένο τμήμα γονιδιωματικού νουκλεϊκού οξέος επανειλημμένα πολλαπλασιάζεται( ενισχύεται) που επιτρέπει τον προσδιορισμό της.Πρώτον, ένα μόριο DNA των βακτηρίων ή ιών με θέρμανση χωρίζεται σε δύο αλυσίδες, στη συνέχεια, με την παρουσία των συντιθέμενων εκκινητών DNA( αλληλουχία νουκλεοτιδίων ειδικά για το καθορισμένο γονιδιωματικό) είναι να τους πρόσδεση με συμπληρωματικές επιμηκύνσεις DNA, συντίθεται ο δεύτερος κλώνος του νουκλεϊνικού οξέος μετά από κάθε εκκινητήρος παρουσία μίας θερμοσταθερής ϋΝΑ πολυμεράσης.Δίδονται δύο μόρια ϋΝΑ.Η διαδικασία επαναλαμβάνεται πολλές φορές.Για τη διάγνωση, μόνο ένα μόριο DNA, δηλ ένα βακτήριο ή σωματίδιο ιού.Αντίδραση ένα επιπλέον βήμα - η σύνθεση του DNA επί του μορίου RNA χρησιμοποιώντας το ένζυμο αντίστροφη μεταγραφάση - επέτρεψε να δοκιμάσει RNA ιούς όπως ο ιός HCV.PCR - διαδικασία τριών σταδίων, επαναλαμβανόμενοι κύκλοι μετουσίωσης, ανόπτησης εκκινητών, σύνθεση του DNA( πολυμερισμός).Η συντιθέμενη ποσότητα DNA αναγνωρίζεται με ELISA ή με ηλεκτροφόρηση.

Η PCR μπορεί να χρησιμοποιηθεί διάφορα βιολογικό υλικό - ορός ή το πλάσμα του αίματος, απόξεση της ουρήθρας, βιοψία, πλευρικό υγρό, εγκεφαλονωτιαίο υγρό, κλπΗ πρώτη PCR χρησιμοποιήθηκε για την διάγνωση μολυσματικών ασθενειών, όπως HBV, HCV, HBV, λοίμωξη CMV, λοιμώδη σεξουαλικά μεταδιδόμενη μόλυνση( γονόρροια, diynaya σκουπίδια, μυκο πλάσμα, λοίμωξη ureaplasmal), φυματίωση, HIV και ούτω καθεξής.ε.πλεονέκτημα

PCR στη διάγνωση μολυσματικών ασθενειών σε σχέση με άλλες μεθόδους μελετών είναι ως ακολούθως:

■ μολυσματικός παράγοντας μπορεί να ανιχνευθεί σε οποιοδήποτε βιολογικό περιβάλλον του οργανισμού, συμπεριλαμβανομένων εκείνων των υλικών που λαμβάνονται με βιοψία?

■ Διάγνωση λοιμωδών νοσημάτων στα πρώιμα στάδια της νόσου.

■ δυνατόν ποσοτική αξιολόγηση των αποτελεσμάτων της έρευνας( ως έναν ιό ή βακτήρια που περιέχονται στο υλικό)?

■ υψηλή ευαισθησία της μεθόδου.π.χ., η ευαισθησία της PCR για την ανίχνευση ΗΒν DNA του ιού στο αίμα είναι 0,001 pg / ml( περίπου 4h102 αντίγραφα / ml), ενώ η ευαισθησία μιας μεθόδου υβριδοποίησης DNA χρησιμοποιώντας ανιχνευτές διακλαδισμένη - 2,1 pg / ml( περίπου 7h105 αντίγραφα / ml).