Καρυοτυπία

Για τη μελέτη των χρωμοσωμάτων, χρησιμοποιούνται βραχυπρόθεσμα παρασκευάσματα καλλιέργειας αίματος, καθώς και κύτταρα μυελού των οστών και καλλιέργειες ινοβλαστών.Το αίμα που παραδίδεται στο εργαστήριο με αντιπηκτικό υποβάλλεται σε φυγοκέντρηση για κατακρήμνιση ερυθρών αιμοσφαιρίων και τα λευκοκύτταρα επωάζονται στο μέσο καλλιέργειας για 2-3 ημέρες.Η φυτοαιμία-γλουτινίνη προστίθεται στο δείγμα αίματος, καθώς επιταχύνει την συγκόλληση των ερυθροκυττάρων και διεγείρει τη διαίρεση των λεμφοκυττάρων.Η πιο κατάλληλη φάση για τη μελέτη των χρωμοσωμάτων είναι η μεταφάση της μίτωσης, έτσι ώστε η κολχικίνη χρησιμοποιείται για να σταματήσει τη διάσπαση των λεμφοκυττάρων σε αυτό το στάδιο.Η προσθήκη αυτού του φαρμάκου στην καλλιέργεια οδηγεί σε αύξηση της αναλογίας των κυττάρων που βρίσκονται σε μεταφάση, δηλαδή στο στάδιο του κυτταρικού κύκλου, όταν τα χρωμοσώματα εμφανίζονται καλύτερα.Κάθε χρωμόσωμα αναπαράγεται( παράγει το δικό του αντίγραφο) και μετά από κατάλληλο χρωματισμό είναι ορατό με τη μορφή δύο χρωματοειδών συνδεδεμένων στο κεντρομερές ή κεντρικής στένωσης.Τα κύτταρα στη συνέχεια κατεργάζονται με ένα υποτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου, σταθεροποιούνται και χρωματίζονται.Για χρωματισμός χρωμοσώματα

χρησιμοποιούνται συχνά Romanowsky-Giemsa βαφή, 2% ή 2% atsetkarmin atsetarsein.Χρωματίζουν χρωμοσώματα εντελώς, ομοιόμορφα( η μέθοδος ρουτίνας) και μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την αναγνώριση των αριθμητικών ανωμαλιών των ανθρώπινων χρωμοσωμάτων.

Για να αποκτήσετε μια λεπτομερή εικόνα της δομής των χρωμοσωμάτων, την ταυτοποίηση( αναγνώριση) μεμονωμένων χρωμοσωμάτων ή των τμημάτων τους, χρησιμοποιούνται διάφορες μέθοδοι διαφορικής χρώσης.Οι πιο συχνά χρησιμοποιούμενες μέθοδοι είναι η Giemsa, καθώς και η κάμψη G και Q.Όταν μικροσκοπία παρασκευαστική

'αναλογία κατά το μήκος του χρωμοσώματος αποκαλύπτει μια σειρά από χρωματιστές( ετεροχρωματίνη) και άβαφη( ευχρωματίνη) μπάντες.Η φύση της εγκάρσιας ραβδωσης, που λαμβάνεται με αυτό τον τρόπο, καθιστά δυνατή την ταυτοποίηση κάθε χρωμοσώματος στο σύνολο, αφού η εναλλαγή των λωρίδων και τα μεγέθη τους είναι αυστηρά ατομικά και σταθερά για κάθε ζεύγος.Ο ρυθμός

κατά μήκος του χρωμοσώματος αποκαλύπτει μια σειρά χρωματισμένων( ετεροχρωματίνης) και μη βαμμένων( ευχρωματίνης) ζωνών.Η φύση της εγκάρσιας ραβδωσης, που λαμβάνεται με αυτό τον τρόπο, καθιστά δυνατή την ταυτοποίηση κάθε χρωμοσώματος στο σύνολο, αφού η εναλλαγή των λωρίδων και τα μεγέθη τους είναι αυστηρά ατομικά και σταθερά για κάθε ζεύγος.

Εικ.Σχηματικοί χάρτες ανθρώπινων χρωμοσωμάτων με διαφορικό χρωματισμό του

.Σχηματικοί χάρτες ανθρώπινων χρωμοσωμάτων με διαφορικό χρωματισμό των πλακών μεταφάσεων

μεμονωμένων κυττάρων φωτογραφίζονται.Τα μεμονωμένα χρωμοσώματα κόβονται από τις φωτογραφίες και επικολλούνται στο φύλλο χαρτιού.μια τέτοια εικόνα των χρωμοσωμάτων ονομάζεται καρυότυπος.Εφαρμογή

επιπλέον χρώση, καθώς και νέες μεθόδους για την παρασκευή των χρωμοσωμικών παρασκευασμάτων, επιτρέποντας τέντωμα του χρωμοσώματος σε μήκος, να αυξήσει σημαντικά την ακρίβεια της κυτταρογενετικής διάγνωσης.

Μια ειδική ονοματολογία έχει αναπτυχθεί για να περιγράψει τον ανθρώπινο καρυότυπο.Ο κανονικός καρυότυπος ενός άνδρα και μιας γυναίκας ορίζεται ως 46, XY και 46, XX, αντίστοιχα.Όταν το σύνδρομο Down που χαρακτηρίζεται από την παρουσία ενός επιπλέον χρωμοσώματος 21( τρισωμία 21), μια γυναίκα που περιγράφεται ως ένα καρυότυπο 47, ΧΧ + 21 και οι άνδρες - 47, ΧΥ, 21+.Με την παρουσία του χρωμοσώματος δομικές ανωμαλίες πρέπει να καθορίζει ένα αλλαγμένο μακράς ή βραχείας ώμου με το γράμμα ρ είναι βραχύ βραχίονα, q - οι μακριά χέρια, t - μετατόπιση.Έτσι, όταν ο βραχύς βραχίονας του χρωμοσώματος 5( το σύνδρομο "γάτα-κραυγή") διαγράφεται, ο θηλυκός καρυότυπος περιγράφεται ως 46, XX, 5ρ-.Η μητέρα ενός παιδιού με μετατόπιση Το σύνδρομο Down - ένας φορέας ισορροπημένης μετατόπισης 14/21 έχει καρυότυπο 45, XX, t( 14q, 21q).Το χρωμόσωμα μετατόπισης σχηματίζεται όταν οι μακρινοί βραχίονες του χρωμοσώματος 14 και 21 συγχωνεύονται, οι βραχίονες ώμοι χαμένοι.

Κάθε ώμος χωρίζεται σε περιοχές, και με τη σειρά τους - σε τμήματα, και αυτές και άλλες σημειώνονται με αραβικούς αριθμούς.Το κεντρομερές του χρωμοσώματος είναι το σημείο εκκίνησης για την καταμέτρηση περιοχών και τμημάτων.

Έτσι, χρησιμοποιούνται τέσσερις δείκτες για τοπογραφία χρωμοσωμάτων: αριθμός χρωμοσωμάτων, σύμβολο ώμου, αριθμός περιοχής και αριθμός τμήματος εντός μιας δεδομένης περιοχής.Για παράδειγμα, 6p21.3 ρεκόρ σημαίνει ότι μιλάμε για το 6ο ζεύγος χρωμοσωμάτων, βραχύ σκέλος του, περιοχή 21, τμήμα 3. Υπάρχουν περισσότερες προαιρετικές χαρακτήρες, ιδίως pter - το τέλος της βραχύ σκέλος, qter - το τέλος του μακρύ βραχίονα.

Η κυτταρογενετική μέθοδος έρευνας επιτρέπει την ανίχνευση διαγραφών και άλλων αλλαγών στα χρωμοσώματα μόνο στο μέγεθος περίπου 1 εκατομμυρίου βάσεων( νουκλεοτιδίων).