שיטות גנטיות מולקולריות

שיטות

DNA טכנולוגיה משמשים כדי לקבוע את לוקליזציה כרומוזום מסוים של הגן מוטציה אחראי על מוצאם של צורות מסוימות של פתולוגיה תורשתית.מאז הגן הוא קטע DNA ו מוטציה גנטית - נזק למבנה העיקרי של ה- DNA( מוטציה מובנת על ידי כל שינויים ברצף ה- DNA, ללא קשר למיקום שלהם ואת השפעתה על יכולת הקיום בודדים) אז דברים סמויים ההכנות של הכרומוזומים החולה metaphase מחלה תורשתית, ניתן להקיםלוקליזציה של הגן הפתולוגי.שיטות של גנטיקה מולקולרית ליצור הזדמנויות לאבחון מחלות ברמה של המבנה הדנ"א שונה, הם מאפשרים לברר את לוקליזציה של הפרעות תורשתיות.שיטות גנטיות מולקולריות יכולות לחשוף מוטציות הקשורות להחלפת בסיס יחיד.

השלב החשוב ביותר של זיהוי גנטי הוא הבידוד שלה.DNA יכול להיות מבודד מכל סוג של רקמה ותא המכילים גרעינים.הצעדים של בידוד DNA כוללים תמס מהיר של התאים על ידי צנטריפוגה עם הסרת שברי אברונים הסלולר ממברנות, הרס אנזימטי של חלבוני החילוץ שלהם מהפתרון עם פנול כלורופורם, ריכוז ה- DNA על ידי משקעי אתנול.

במעבדות גנטיות קרוב DNA שבודד לויקוציטים, אשר החולה נלקח 5-20 דם ורידי מיליליטר בתוך שפופרת סטרילית עם פתרון של נוגד קרישה( הפרין).לוקוציטים מופרדים ומעובדים בהתאם לשלבים המתוארים לעיל.השלב הבא

של הכנת החומר ללימוד - DNA "לחתוך" לתוך שברים באתרים עם רצף בסיס מאוד ספציפי מבוצע באמצעות אנזימים חיידקיים - endonucleases הגבלה( אנזימי הגבלה).אנזימי הגבלה להכיר רצפים ספציפיים של 4-6, לפחות 8-12 נוקלאוטידים לתוך מולקולת הדנ"א הדו-גדילים והמופרד שלה לרסיסים של רצפים אלה בתרגום אתרים שנקראים אתרי הגבלה.מספר שברי הדנ"א המגבילים נקבע על ידי תדירות אתרי ההגבלה, וגודל השברים נקבע על ידי התפלגות האתרים הללו לאורך מולקולת הדנ"א המקורית.לעתים קרובות יותר את אתרי ההגבלה ממוקמים, קצר יותר את שברי הדנ"א לאחר הגבלה.כיום, יותר מ 500 סוגים שונים של אנזימים הגבלה של מוצא חיידקי ידועים, וכל אחד מאנזימים אלה מזהה רצף מסוים של נוקליאוטידים.בעתיד, אתרי הגבלה יכולים לשמש כסמנים גנטיים לדנ"א.שברי ההגבלה DNA וכתוצאה מכך ניתן למיין לפי אורך ידי אלקטרופורזה ב agarose ג'לים או polyacrylamide, ובכך עשוי להיקבע המשקל המולקולרי שלהם.בדרך כלל לגילוי DNA בתוך הג'ל בשימוש על ידי מכתים ספציפיים( לרוב ברומיד ethidium) וצפייה ג'ל המשודר להדליק את האולטרה סגול.מיקומים של לוקליזציה DNA יש צבע אדום.עם זאת, אדם בעיבוד של מספר הגבלה DNA endonucleases נוצרו כל כך הרבה שברי באורכים שונים כי הם לא מצליחים להיות מופרדים על ידי אלקטרופורזה, זה לא אפשרי מבחינה ויזואלית לזהות את שברי DNA הפרט elektrofore-גרם( צבע אחיד המיוצר לאורכה של ג'ל).לכן, שיטת הכלאה עם בדיקות DNA שכותרתו משמש כדי לזהות את שברי ה- DNA הרצוי ג'ל כזה.

כל קטע של DNA גדילי יחיד או RNA הוא מסוגל להיקשר( להכליא) עם שרשרת המשלימים שלה, עם גואנין תמיד קשור ציטוזין, אדנין עם תימין.זהו מבנה של מולקולה כפולה.אם עותק חד-גדילי של הגן המשובט מסומן בתווית רדיואקטיבית, יתקבל בדיקה.החללית יכולה למצוא קטע משלים של דנ"א, אשר מזוהה בקלות על ידי הרדיו.חללית רדיואקטיבי מתווספת הכרומוזומים נמתחו התרופה מאפשר למקם את הגן על כרומוזום מסוים עם בדיקת DNA יכול לזהות חלקים מסוימים כתם דרום.הכלאה מתרחשת אם חלק הבדיקה של ה- DNA מכיל גן רגיל.במקרה שבו קיים רצף נורמלי של נוקלאוטידים, דהיינו המבנים כרומוזום המקבילים מכילים גן המוטנטי, הכלאה לא תתרחש, המאפשר לקבוע לוקליזציה של הגן הנורמלי.

כדי להשיג בדיקות DNA, שיטת שיבוט הגן משמש.מהות השיטה מורכבת כי קטע DNA מתאים לכל גן או באזור של הגן מוכנס לתוך חלקיק השיבוט, בדרך כלל פלסמיד חיידקים( בהווה DNA extrachromosomal עגול תאים חיידקיים נושאת גנים עמידים לאנטיביוטיקה), ולאחר מכן החיידקיםלאחר פלסמיד עם מובנה

האדםגן

, להכפיל.הודות לתהליכי הסינתזה של הפלסמיד, ניתן להשיג מיליארדי עותקים של הגן האנושי או של האתר שלו.

עותקים נוספים של דנ"א שכותרתו תווית רדיואקטיבית או פלואורוכרומים משמשים כבדיקות לחיפוש רצפים משלימים בין מאגר מולקולות הדנ"א שנחקרו.

כיום, ישנם סוגים רבים של שיטות באמצעות בדיקות DNA לאבחון של מוטציות גנטיות.