Karyotyping
לחקר הכרומוזומים, ההכנות לטווח קצר של דם, כמו גם תאי מוח העצם ותרבויות fibroblast משמשים לרוב.הדם נמסר למעבדה עם נוגדי קרישה נתון צנטריפוגה עבור משקעים של כדוריות דם אדומות, ו leukocytes מודגרות במדיום התרבות במשך 2-3 ימים.Phytohemag-glutinin מתווסף לדגימת הדם, כפי שהוא מאיץ את התלכדות של אריתרוציטים וממריץ את חלוקת לימפוציטים.השלב המתאים ביותר ללימוד כרומוזומים הוא metaphase של מיטוזה, כך קולצ'יצין משמש כדי לעצור את חלוקת לימפוציטים בשלב זה.הוספת תרופה זו לתרבות מובילה לעלייה באחוז התאים הנמצאים במטאפיס, כלומר, בשלב מחזור התא, כאשר הכרומוזומים נראים בצורה הטובה ביותר.כל כרומוזום משכפל( מייצר עותק משלו) ולאחר הצביעה המתאימה ניתן לראות בצורה של שני כרומטידים המצורפים centromere או התכווצות מרכזית.התאים מטופלים אז עם פתרון כלורי נתרן היפוטוני, קבוע ומוכתם.
לצביעת הכרומוזומים, צבע רומנובסקי-ג'מסה, אצטמינומיום 2% או אצטזארין 2% משמשים לעתים קרובות יותר.הם כתמים כרומוזומים לחלוטין, אחיד( השיטה השגרתית) והוא יכול לשמש כדי לזהות אנומליות מספריות של כרומוזומים אנושיים.
כדי לקבל תמונה מפורטת של המבנה של כרומוזומים, זיהוי( זיהוי) של כרומוזומים בודדים או המגזרים שלהם, שיטות שונות של מכתים דיפרנציאלי משמשים.השיטות הנפוצות ביותר הן Giemsa, כמו גם G ו- Q- כיפוף.כאשר מיקרוסקופי prepa-
rata לאורך אורכו של כרומוזום, סדרה של כתמים( heterochromatin) ו צבוע( eochromatin) להקות מתגלה.אופי ההפצה הרוחבית, המתקבל בדרך זו, מאפשר לזהות כל כרומוזום בסט, כיוון שהחלופות הפסים וגודלם הם אינדיווידואליים וקבועים עבור כל זוג.
rata לאורך אורכו של כרומוזום מגלה שורה של להקות( heterochromatin) מוכתמות( euchromatin) להקות.אופי ההפצה הרוחבית, המתקבל בדרך זו, מאפשר לזהות כל כרומוזום בסט, כיוון שהחלופות הפסים וגודלם הם אינדיווידואליים וקבועים עבור כל זוג.
איור.מפות סכמטיות של כרומוזומים אנושיים עם צבע דיפרנציאלי של
איור.מפות סכמטיות של כרומוזומים אנושיים עם צבע דיפרנציאלי של
לוחות Metaphase של תאים בודדים מצולמים.כרומוזומים בודדים נחתכים מהתצלומים ומודבקים על גיליון הנייר לפי הסדר;תמונה כזו של כרומוזומים נקראת קריוטיפ.
השימוש בכתמים נוספים, כמו גם שיטות חדשות להשגת תרופות כרומוזומליות המאפשרות מתיחות כרומוזומים באורך, מגדילים באופן משמעותי את הדיוק של אבחנה ציטוגנטית.
פותח נומנקלציה מיוחדת לתיאור הקאריאוטיפ האנושי.הקאריאוטיפ הרגיל של גבר ואשה הוא 46, XY ו- 46, XX בהתאמה.בתסמונת דאון, המתאפיינת בנוכחות כרומוזום נוסף 21( trisomy 21), הקאריאוטיפ של האישה מתואר כ- 47, XX 21 +, וגברים - 47, XY, 21+.בנוכחות של אנומליה מבנית של הכרומוזום, יש צורך להצביע על זרוע ארוכה או קצרה: האות p מציינת זרוע קצרה, q זרוע ארוכה, ולא טרנסלוקציה.לכן, כאשר הזרוע הקצרה של כרומוזום 5( תסמונת "חתול-הצרחות") נמחקת, הקאריאוטיפ הנשי מתואר כ- 46, XX, 5p.האם של ילד עם טרנסלוקציה תסמונת דאון - נשא של טרנסלוקציה מאוזנת של 14/21 יש קריוטיפ של 45, XX, t( 14q, 21q).כרומוזום הטרנסלוקציה נוצר כאשר הזרועות הארוכות של הכרומוזום 14 ו -21 מתמזגות, הכתפיים הקצרות אבודות.
כל כתף מחולקת למחוזות, והם בתורם - לחלקים, ואלה ואחרים מסומנים על ידי ספרות ערביות.Centromere של כרומוזום הוא נקודת המוצא לספירת אזורים ומגזרים.
לכן, ארבעה סמנים משמשים לטופוגרפיה כרומוזום: מספר כרומוזום, סמל הכתף, מספר האזור ומספר הפלח באזור נתון.לדוגמה, הקלטה של 6p21.3 פירושה שהיא כרומוזום של הצמד השישי, כתף קצרה, אזור 21, קטע 3. ישנם סמלים נוספים, בפרט pter - סוף הזרוע הקצר, qter - סוף הזרוע הארוכה.
שיטת הציטוגנטית של החקירה מאפשרת לזהות מחיקות ושינויים אחרים בכרומוזומים רק בגודל של כמיליון בסיסים( נוקליאוטידים).