cariotipo
Per lo studio dei cromosomi, i preparati a breve termine per emocolture, così come le cellule di midollo osseo e le colture di fibroblasti sono più spesso utilizzati. Il sangue consegnato al laboratorio con anticoagulante viene sottoposto a centrifugazione per la precipitazione dei globuli rossi e i leucociti vengono incubati nel terreno di coltura per 2-3 giorni. Il fitoagro-glutinina viene aggiunto al campione di sangue, in quanto accelera l'agglutinazione degli eritrociti e stimola la divisione dei linfociti. La fase più adatta per lo studio dei cromosomi è la metafase della mitosi, quindi la colchicina viene utilizzata per fermare la divisione dei linfociti in questa fase. L'aggiunta di questo farmaco alla coltura porta ad un aumento della proporzione di cellule che si trovano in metafase, cioè in quella fase del ciclo cellulare, quando i cromosomi sono meglio visibili. Ogni cromosoma si replica( produce la propria copia) e dopo la colorazione appropriata è visibile sotto forma di due cromatidi attaccati al centromero o alla costrizione centrale. Le cellule vengono quindi trattate con una soluzione di cloruro di sodio ipotonica, fissate e colorate.
Per la colorazione dei cromosomi, vengono utilizzati più frequentemente il colorante Romanovsky-Giemsa, il 2% di acetaminomina o il 2% di acetazina. Colorano i cromosomi interamente, in modo uniforme( il metodo di routine) e possono essere utilizzati per identificare anomalie numeriche dei cromosomi umani.
Per ottenere un'immagine dettagliata della struttura dei cromosomi, identificazione( determinazione) dei singoli cromosomi o dei loro segmenti, vengono utilizzati vari metodi di colorazione differenziale. I metodi più comunemente usati sono Giemsa, così come G-e Q-bending. Quando microscopico prepa-
rata lungo la lunghezza del cromosoma, viene rivelata una serie di bande colorate( eterocromatina) e non verniciate( eucromatina).La natura della striatura trasversale, ottenuta in questo modo, rende possibile identificare ciascun cromosoma nell'insieme, poiché l'alternanza delle strisce e le loro dimensioni sono strettamente individuali e costanti per ogni coppia.
rata lungo la lunghezza del cromosoma rivela una serie di bande colorate( eterocromatina) e non verniciate( eucromatina).La natura della striatura trasversale, ottenuta in questo modo, rende possibile identificare ciascun cromosoma nell'insieme, poiché l'alternanza delle strisce e le loro dimensioni sono strettamente individuali e costanti per ogni coppia.
Fig. Mappe schematiche di cromosomi umani con colorazione differenziale di
Fig. Le mappe schematiche dei cromosomi umani con colorazione differenziale delle placche di metafase
delle singole cellule vengono fotografate. Singoli cromosomi vengono tagliati dalle fotografie e incollati sul foglio di carta in ordine;una tale immagine di cromosomi è chiamata cariotipo.
L'uso di colorazione aggiuntiva, nonché nuovi metodi per ottenere farmaci cromosomici che consentano di allungare i cromosomi in lunghezza, aumentano significativamente l'accuratezza della diagnostica citogenetica.
È stata sviluppata una nomenclatura speciale per descrivere il cariotipo umano. Il normale cariotipo di un uomo e una donna è indicato rispettivamente come 46, XY e 46, XX.Nella sindrome di Down, caratterizzata dalla presenza di un cromosoma 21 aggiuntivo( trisomia 21), il cariotipo della donna è descritto come 47, XX 21 +, e gli uomini - 47, XY, 21+.In presenza di un'anomalia strutturale del cromosoma, è necessario indicare un braccio lungo o corto alterato: la lettera p indica un braccio corto, q un braccio lungo e una traslocazione. Così, quando il braccio corto del cromosoma 5( la sindrome del "gatto-grido") viene cancellato, il cariotipo femminile viene descritto come 46, XX, 5p-.La madre di un bambino con traslocazione sindrome di Down - un portatore di una traslocazione bilanciata di 14/21 ha un cariotipo di 45, XX, t( 14q; 21q).Il cromosoma di traslocazione si forma quando le lunghe braccia del cromosoma 14 e 21 si uniscono, mentre le spalle corte si perdono.
Ogni spalla è divisa in distretti, e a loro volta - in segmenti, e quelli e altri sono indicati con numeri arabi. Il centromero del cromosoma è il punto di partenza per il conteggio di regioni e segmenti.
In questo modo vengono utilizzati quattro marcatori per la topografia cromosomica: numero cromosomico, simbolo della spalla, numero area e numero segmento all'interno di una data regione. Ad esempio, il record 6p21.3 significa che è un cromosoma della sesta coppia, la sua spalla corta, area 21, segmento 3. Vi sono simboli aggiuntivi, in particolare pter - la fine del braccio corto, qter - la fine del braccio lungo.
Il metodo di indagine citogenetico consente di rilevare le delezioni e altri cambiamenti nei cromosomi solo nella dimensione di circa 1 milione di basi( nucleotidi).